189515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 20-dihidro-20,23-didexi-tionolid (tilakton) és észterei előállítására
1 189515 2 /ük (lásd például Kennedy, J. Chromatographic Science, 16, 492 -495, .978). A süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között megvalósított termelést követően a tilaktont a táptalajból a fermentációs iparban szokásosan használt módszerekkel különítjük el. A tilakton vízben korlátozottan oldódik, így nem oldódik abban a közegben, amelyben termeljük. A tilakton kinyerését ily módon a tenyészet extrakciójával, vagy a tenyészet szűrésével és a szűrt lé, továbbá a micélium extrakciójával végezzük. Extrakciókor különböző módszereket használhatunk. A szűrt lé tisztítását előnyösen a szűrlet pH-értékének beállítása nélkül, előnyös oldószerekkel, például amil-acetáttal vagy petrol-éterrel végezzük, a szerves fázist csökkentett nyomáson töményítjük; ezután desztillációs maradékként kristályos vagy olajos anyagot kapunk. Ha olajos anyag a termék, úgy azt adszorpciós kromatográfiával tisztíthatjuk tovább. Az (1) és (II) képletű vegyületek előnyösen használhatók intermedierként 16-tagú makrolid antibiotikumok előállítására. így például az I képletű tilakton tilozinná biokonvertálható oly módon, hogy a biokonverziót elvégző mikroorganizmus növekvő tenyészetéhez adjuk. A biokonverziót elvégző mikroorganizmus olyan Streptomyces fradiae törzs lehet, amely vagy termeli magát a tilozint, vagy képes a tilozin termelésére; azonban a tilakton bioszintézise gátolt. Olyan törzs előállítására, amely a tilakton bioszintézisén kívül képes a tilozin termelésére, oly módon állíthatunk elő, hogy egy tilozint termelő törzset mutagénnel kezelünk, és a túlélők között tilozin termelésére nem képes egyedeket keresünk. A tilozin termelésére nem képes túlélőket ezután tovább vizsgáljuk, annak megállapítására, hogy ezek a törzsek képesek-e tilaktont termelni. Ezeket a törzseket úgy különböztethetjük meg, hogy a kiválasztott túlélők rázott tenyészetéhez tilaktont adunk, és mérjük a keletkező tilozint. A tilozin termelésére képes törzsek például a Streptomyces. fradiae NRRL 2702 és az NRRL 2703. A fenti törzseket például N-metil-N'-nitronitrozó-guanidinnel állíthatjuk elő. Az (I) képletű vegyületet különösen előnyösen használhatjuk anyagcsere-vizsgálatokhoz szükséges, radioaktívan jelzett vegyületek előállításakor. A tilozin metabolikus sorsa bizonyítható oly módon, hogy a vizsgálatokat a tilakton-részen, vagy a hozzáadott cukor-molekulán jelzett vegyülettel végezzük. A találmány szerinti eljárást a továbbiakban példákkal szemléltetjük. I. példa A) A tilakton előállítása rázott tenyészetben 1-2 ml steril vízben szuszpendáljuk a Streptomyces fradiae NRRL 12 188 fagyasztva szárított tenyészetét. 0,5 ml szuszpenzióval 150 ml, alábbi összetételű vegetatív táptalajt oltunk : Összetevő Mennyiség (%) kukoricalekvár 1,0 élesztőkivonat 0,5 szójabab dara 0,5 kalcium-karbonát 0,3 szójabab olaj (nyers) 0,45 ionmentes víz 97,25 Eljárhatunk oly módon is, hogy folyékony nitrogénben tartott, 1 ml térfogatú S. fradiae NRRL 12 188 vegetatív tenyészetet felolvasztunk, és ezzel oltjuk a vegetatív táptalajt. A beoltott vegetatív táptalajt 500 ml térfogatú Erlenmeyer-lombikokban inicubáljuk 29 °C hőmérsékleten, 48 órán át, olyan zárt rázógépben, amely percenként 300-at fordul. Az inkubált vegetatív tenyészet 0,5 ml-ével 7 ml alábbi öszetételű termelő táptalajt oltunk: Összetevő Mennyiség (%) répamelasz 2,0 kukoricaliszt 1,5 halliszt 0,9 kukoricadara 0,9 nátrium-klorid 0,1 diammónium-hidrogén-0 04 foszfát kalcium-karbonát 0,2 szójabab olaj (nyers) 3,0 ionmentes víz 91,36 A beoltott főfermentációs táptalajt 50 ml térfogatú lombikokban inkubáljuk, 29 °C hőmérsékleten, 6 napon át, olyan zárt rázógépben, amely percenként 300-at fordul. B) A tilakton előállítása tankfermentorban Nagymennyiségű inokulum előállítására 60 ml kinőtt vegetatív tenyészettel, amit az A) pont szerint állítottunk elő, 38 liter második fokozatú vegetatív táptalajt oltunk. Ennek összetétele a következő: összetevő Mennyiség (%) kukoricalekvár 1,0 szójabab liszt 0,5 élesztőkivonat 0.5 kalcium-karbonát 0,3 szójabab olaj (nyers) 0.5 lecitin (nyers) 0,015 viz 97.185 A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxid-oldattal 8,5-re állítjuk be. A második fokozatú vegetatív táptalajt 68 liter 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
