189515. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 20-dihidro-20,23-didexi-tionolid (tilakton) és észterei előállítására
1 189 515 2 térfogatú fermentorban tenyésztjük 47 órán át, 29 °C hőmérsékleten. 4 liter kinőtt, második fokozatú tenyészettel 40 liter steril, alábbi összetételű főfermentációs táptalajt oltunk: Összetevő Mennyiség (%) halliszt 0,92 kukoricaliszt 1,57 kukoricadara 0,92 kalcium-karbonát 0,21 nálrium-klorid 0,10 diammónium-hidrogénfoszfát 0,04 répamelasz 2,10 szójabab olaj (nyers) 3,15 lecitin 0,09 víz 90,90 A táptalaj pH-ját 50%-os nátrium-hidroxidoldattal 7,2-re állítjuk be. A beoltott főfermentációs táptalajt 68 liter térfogatú fermentorban, 5 napon át, 28 °C hőmérsékleten tenyésztjük. A fermentációs táptalajon annyi steril levegőt vezetünk át, hogy a tenyészetben oldott oxigén szintje 30% és 50% között legyen, a keverést konvencionális keverővei végezzük; ezt percenként 300-as fordulatszámmal működtetjük. 2. példa A tilakton izolálása Az 1. példában megadottak szerint előállított 1600 liter térfogatú tenyészetet szűrési segédanyag jelenlétében (3% Hyflo Supercel, diatómaföld, Johns Manville Corp.) szűrjük. A szűrlet pH-ját 2%-os nátrium-hidroxid-oldattal 9-re állítjuk be. 400 liter amil-acetáttal extraháljuk a szűrletet. A magas optikai sűrűségű (282 nm), de biológiai aktivitással nem rendelkező amil-acetátos extraktumot csökkentett nyomáson desztilláljuk, amikor olajos desztillációs maradékot kapunk. Ezt az olajat 5 liter benzolban oldjuk. A benzolos oldatot körülbelül 13 x 80 cm méretű szilikagélből (Grace, grade 62, Davison Chemical Co.) készült oszlopon kromatografáljuk, az oszlopot benzollal egyensúlyozzuk ki. Az elúciót szilikagél vékonyrétegkromatográfiával követjük, a futtatást benzol és etil-acetát 3:2 arányú elegyével végezzük, a lemezeket tömény kénsavas permettel hívjuk elő. Az oszlopról először benzollal eluáljuk a lipideket, ezután a tilakton elkülönítésére és izolálására benzol és etil-acetát 9:1 arányú elegyével folytatjuk az eluálást. A tilaktont tartalmazó frakciókat egyesítjük és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A tilaktont benzol és hexán elegyéböl vagy forró hexánból kikristályosítva 2 g, 162-163 °C hőmérsékleten olvadó terméket kapunk. A tilakton kloroformos oldatában vizsgált infravörös abszorpciós spektrumát a mellékelt ábrán adjuk meg. A tilakton fehér szinü, szilárd halmazállapotú anyag, hexánból vagy etil-acetát és hexán elegyéböl kristályosodik, 162-163 °C hőmérsékleten olvad. Közelítő elemanalízise a következő: szén: 70%; hidrogén: 9,7%; oxigén: 20,3%. Tapasztalati képlete : C23H3805, molekulasúlya 394. A tilakton kloroformos oldatban vizsgált infravörös abszorpciós spektrumát a mellékelt ábrán adjuk meg. A következő frekvenciákon (cm ') látszik elnyelési maximum: 3534 (közepes), 2924 (erős), 2398 (gyenge), 2353 (gyenge), 1709 (igen erős), 1678 (igen erős), 1626 (kicsi), 1592 (igen erős), 1458 (erős), 1441 (váll), 1404 (erős), 1379 (kicsi), 1316 (erős), 1284 (közepes), 1181 (igen erős), 1143 (erős), 1103 (közepes), 1078 (közepes), 1049 (igen kicsiny), 1025 (közepes), 984 (igen erős). 958 (erős), 923 (közepes), 911 (váll), 859 (kicsi), 868 (közepes), 840 (közepes), 820 (igen kicsiny) és 661 (kicsi). A tilakton ultraibolya abszorpciós spektrumát semleges etanolos oldatban vizsgáltuk, elnyelési maximum látszik a 282 nm-es hullámhosszon (E!*cm: 560). A tilakton specifikus forgatással a következő: [a]o : -55,23° (konc.: 1, metanol). A tilakton 66%-os. vizes dimetil-formamidban vizsgált elektrometrikus tilrálása szerint titrálható csoportokat nem tartalmaz. A tilakton vízben közel oldhatatlan, oldódik azonban szerves oldószerekben, például acelonban, metanolban, etanolban, dimetil-formamidban, kloroformban, dietil-éterben, petroléterben. benzolban és dimetil-szulfoxidban. A tilakton szilikagél vékonyréteg-kromalográtíával megkülönböztethető a tilozintól. A detektálást kénsavas permettel végezzük, ezt tömény vagy hig (50%-os) oldatból állítjuk elő. A fenti előhívóval a tilakton kezdetben sárga-barnás színű foltként jelentkezik. Ha fluoreszcens háttérrel rendelkező szilikagél lemezeket használunk a kromatográfiához, úgy ultraibolya-detekciót is használhatunk. A tilakton R,-értékeit az. 1. táblázatban adjuk meg. /. Táblázat A tilakton vékonyréteg-kromatográfiás Rj-crtckei' Vegyület K,■érték Ab B tilakton 0,50 0,62 tilozin 0,0 0,0 :| = Közeg: szilikagél. b = Oldószer-elegy : A = benzol és etil-acetát 4:1 arányú elegye B = benzol és etil-acetát 3:2 arányú elegye. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
