189512. lajstromszámú szabadalom • Eljárás makrolid antibiotikumok előállítására
.189 512 2 II. táblázat (folytatás) E2724.1 NRRL 12 170 Paradi-G rendkívül jól fejlett csőm-R jól fejlett paszta-92. y. fehér 87. m. sárga zabliszt Am rendkívül jól fejlett, nincs 263. fehér Sp nincs nincs 1 = A spórák felületének ornamentációját elektronmikroszkóppal vizsgáltuk. J= G: növekedés; R: a telepek hátoldala, vagy oldalaik; Am: légmicélium; Sp: oldódó színanyag. 3= A színek jeleit az ISCC-NBS színskála szerint adjuk meg (Kelly és Judd, The ISCC-NBS Centroid Color Charts Standard Sample No. 2106, „U.S. Dept, of Commerce, National Bureau of Standards, Washington, D. C. 20234). III. Táblázat Antibiotikumérzékenység“ b Antibiotikum Koncentráció Vizsgált vegyület E2724.1 NRRL 12 170 kloramfenikol 30 pg nitrofenilvegyülct + + eritromicin 15 pg makrolid tr tr Cefaloridin 30 pg ß-laktam + + linkomicin 2 pg iinkózaminidpolimixin B 300 egység pepiid tr tr streptomicin 10 pg aminoglüközid + + tetraciklin 30 pg tetraciklin + + vankomicin 30 pg glükopeptid + + a = Az érzékenységet beoltott agarlemezekre helyezett korongokkal határoztuk meg. b= - rezisztens (nincs gátlási zóna) = + érzékeny (gátlási zóna látható) = tr érzékenység nyomai. IV. Táblázat Szénforrás hasznosítás b Szénforrás E2724.1 NRRL 12 170 kontroll: nincs szénforráskontroll: glükóz + + L-arabinóz+ D-fruktóz + + D-galaktóz + + i-inozit + + D-mannit+ raffinózszalicinszaccharóz + + D-xilóz + + D-rhamnóz + a - = nincs hasznosítás; + => hasznosítja, b = Az International Streptomyces Project (ISP# 9) (szénforrás hasznosítási agar) alaptáptalajon határoztuk meg. amihez szűrve sterilezett szénforrást adtunk minden esetben 1,0%-os menynyiségben. A lemezeket 30 *C-on tenyésztettük, és a 7-12. napon olvastuk le. 5 10 15 V. táblázat Egyéb élettani tulajdonságok E2724.1 NRRL 12 170 ISP# 1 (kromogenitás)ISP#6 (kromogenitás) — — ISP#7 (kromogenitás) — — zselatin-elfolyósítás+ fölözött tej-reakció — — növekedés különböző pH-értékeken1-2 6,1-8,8 6,1-7,8 növekedés különböző hőmérsékleten1,3 10-37 ’C 10-30‘C nátrium-klorid tolerancia1,4 8% 4% keményitő-hidrolizis’ + + nitrát-redukció + + kataláz4 + + foszfatáz* + + ureáz6 — — 2Q 1 = 1SP#2 táptalajon (élesztő kivonat-maláta kivonat-agar); 7 napon át inkubálva. 2= 0,05 mólos, alábbi puffereket használtuk: citromsav, pH 3, 4, 5; 2-(N-morfolino)-ctán-szulfonsav, pH 6; 3-(N-morfolino)propán-szulfonsav, pH 7; N-2-hidroxi-etil-piperazin-N'-2-etánszulfonsav, pH 8; 2-amino-2-(hidroxi-metil)-1,3-propán-diol, 2Ö pH 9; 3-ciklohexil-amino-l,l-propán-szulfonsav, pH Í0, 11. 3 Az agarok pH-ját 7 napos inkubációt követően megmértük, mivel egyes pufferek nem tartották az eredetileg beállított pH- értéket. A puffer toxicitását oly módon vizsgáltuk, hogy az összes puffer pH-ját 7,0-ra állítottuk be, és vizsgáltuk a növekedést. Toxicitást nem figyeltünk meg. J= 5, 10, 15, 20, 25, 30, 37, 40, 45, 50 és 55 ’C hőmérsékleten 30 vizsgáltuk. *= Az agárhoz nátrium-kloridot adtunk, 0, 2, 4, 6, 8, 10 és 12%-os koncentrációban. 5 = A keményítő hidrolízisét szervetlen só-keményítő-agaron (ISP#4) vizsgáltuk, oly módon, hogy a jelenlévő keményítőt jóddal mutattuk ki. 35 • = Az enzim méréséhez Blazevic és Ederer módszerét használtuk (Blazevicés Ederer, Principles of Biochemical Tests in Diagnostic Microbiology, John Wiley and Sons, New York, N. Y., 1975). 40 Az előző tulajdonságok alapján a DMT- és dihidro-DMT-t termelő NRRL 12 170 mikroorganizmust a Streptomyces fradiae új törzsének határoztuk meg. A tenyészetet letétbe helyeztük a Northern Regional Research Center, Agricultural Re- 45 search. North Central Region, 1815 North University Street, Peoria, Illinois, 61 604 törzsgyüjteményébe, ahonnan ez NRLL 12 170 szám alatt hozzáférhető. Ahogy az más mikroorganizmusoknál is előfor- 50 dúl, a Streptomyces fradiae NRRL 12 170 tulajdonságai variálnak. így például az NRRL törzs mesterséges variánsai és mutánsai állíthatók elő oly módon, hogy a sejteket különböző ismert fizikai és kémiai mutagénekkei kezeljük, például ultraibolya 55 sugarakkal, X-sugarakkal, gamma-sugarakkal, és N-metil-N'-nitro-N-nitrozó-guanidinnal. A találmány oltalmi köréhez tartoznak a Streptomyces fradiae NRRL 12 170 összes természetes és mesterséges variánsai, mutánsai és rekombinánsai, ame- 60 lyek termelik a DMT-t. A DMT vegyületek gátolják a patogén baktériumok, különösen a Gram-pozitiv festődésű baktériumok és a Mycoplasma fajok növekedését. A VI. táblázatban összefoglaljuk az ismert agar-higításos 66 módszerrel meghatározott legkisebb növekedésgát-5
