189287. lajstromszámú szabadalom • Eljárás G- és V-penicillin előállítására
189 287 2 előfermentációt 630 liter alaptáptalajba oltottuk, melynek összetétele a következő volt: (Földi)mogyoróliszt 2,5 % Kukoricalekvár 100%-os 1,0 % Nátrium-tioszulfát 0,06% Kalcium-karbonát 0,78% Napraforgóolaj 0,28% A fermentációs paraméterek a következők voltak:- felhasznált energia: 2,2 kW/m3-hőmérséklet: 25 °C- belső nyomás : 1,019 x 10e Pa A fermentációt 120 órán át futtattuk 25 “C-on. Ezalatt összesen 11,2% szénforrást adagoltunk a tenyészethez (a szénforrás 4%-a napraforgóolaj, 96%-a szacharóz volt). A fermentáció során a fermentlé fenil-ecetsavtartalmát 0,05% értéken tartottuk folyamatos fenilecetsav adagolással. A pH szabályozására ammónium-szulfátot, ammónium-hidroxidot és ammónium-hidroxiddal párhuzamosan 1 :2 arányban kálium-hidroxidot alkalmaztunk úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy a pH 6,2-6,9; az oldott nitrogén-tartalom 0-105 órás kor között 10-75 mg/100ml érték között maradjon. A beadott ammónium-szulfát mennyisége 0,76%, a beadott ammónium-hidroxid mennyisége 0,17%, a beadott kálium-hidroxid mennyisége 0,28% volt a fermentáció végtérfogatára vonatkoztatva. A fermentlé G-penicillin tartalma 120 órás korban 29 980 NE/ml értéket ért el. A bioszintézis során 1000 egység G-penicillin szintetizálására 0,26 mg fenil-ecetsav volt szükséges. A fentiekben leírt módon készített fermentáció biokémiai paramétereinek alakulását a 3. számú táblázat szemlélteti. A fermentléből kinyert G-penicillin-káliumsó olvadáspontja (bomlik): 213-216 °C, hatóanyagtartalma (jodometrikusan): 98,0%. 3. sz. táblázat Kor óra pH szacharóz % oldott N Sörensen szerint mg/100 ml sejttömeg** % titer NE/ml st.tpt.* 6,40 0,35 58,3 — 0 6,50 0,40 54,6 14 12 6,41 0,05 68,6 16 20 6,55 0,12 91,0 22 32 6,80 0,06 36,4 38 5 600 44 6,82 0,08 42,0 36 9 200 56 6,50 0,09 42,0 44 13000 68 6,60 0,10 36,0 46 15 800 76 6,50 0,12 35,0 46 18 700 92 6,52 0,14 43,4 43 22 000 , 97--42 24 750 100 6,40 0,14 40,6 43 26 900 116 6,35 0,16 51,8 44 28 700 120 6,29 0,18 53,2 44 29 800 * steril táptalaj •* a fermentációs tenyészet térfogatára vonatkoztatva. 4. példa: Az URCM jelzésű Pénicillium chrysogenum törzsből 80 liter előfermentációt készítettünk. Az előfermentációt 630 liter alaptáptalajba oltottuk, melynek Összetétele a következő volt : (Földi)mogyoróliszt 2,5 % Kukoricalekvár 100%-os 1,0 % Nátrium-tioszulfát 0,06% Kalcium-karbonát 0,78% Napraforgóolaj 0,28% A fermentációs paraméterek a következők voltak:- felhasznált energia: 2,2 kW/m3- hőmérséklet: 25 °C- belső nyomás: 1,019 x 106 Pa A fermentációt 120 órán át futtattuk 25 °C-on. Ezalatt összesen 11 % szénforrást adagoltunk a tenyészethet (a szénforrás 6%-a napraforgóolaj. 94 %a szacharóz volt). A fermentáció 0 órás korában 0,6% fenoxi-ecctsavat adagoltunk a fermentléhez. 90 órás korban, minthogy a fenoxi-ecetsav-tartalom 0,05% alatti értékre csökkent, további 0,35% fenoxi-ecetsavat adagoltunk a fermentléhez. A pH szabályozására ammónium-szulfátot, ammónium-hidroxidot és ammónium-hidroxiddal párhuzamosan 1 :2 arányban kálium-hidroxidot alkalmaztunk úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy a pH 6,2-6,9; az oldott nitrogén-tartalom 0-105 órás korban 20-75 mg/100 ml érték között maradjon. A beadott ammónium-szulfát mennyisége 0,77%, a beadott ammónium-hidroxid mennyisége 0,16%, a beadott kálium-hidroxid mennyisége 0,2% volt a fermentáció végtérfogatára vonatkoztatva. A fermentlé V-penicillin tartalma 120 órás korban 31 120 NE/ml értéket ért el. A bioszintézis során 1000 egység V-penicillin szintetizálására 0,265 mg fenoxi-ecetsav volt szükséges. A fentiekben leírt módon készített fermentáció biokémiai paramétereinek alakulását a 4. számú táblázat szemlélteti. A fermentléből kinyert V-penicilllin-sav olvadáspontja (bomlik): 118-123 °C, hatóanyagtartalma (potenciometrikusan): 96,8%. 4. sz. táblázat Kor óra PH szacharóz % oldott N Sörensen szerint mg/100 ml sejttömeg** % titer NE/ml st.tpt.* 6,15-70,2 _ 0 5,95 0,30 68,7 15 3 6,05 0.30 65,8 18 11 6,10 0,10 33,6 28 19 6,25 0,08 21,0 31 27 6.60 0,06 30,8 34 35 6,65 0,08 36,4 37 4 580 42 6,50 0,09 22,4 40 6 740 51 6,75 0,10 43,4 42 9 120 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
