189287. lajstromszámú szabadalom • Eljárás G- és V-penicillin előállítására
1 189 287 2 hogy a pH 6,2-6,9; az oldott nitrogéntartalom 0—105 órás kor között 20-75 mg/100 ml érték között maradjon. A beadott ammónium-szulfát mennyisége 0,82%, a beadott ammónium-hidroxid mennyisége 0,13%, a beadott kálium-hidroxid mennyisége 0,28% volt a fermentáció végtérfogatára vonatkoztatva. A fermentié G-penicillin tartalma 140 órás korban 24 600 NE/ml értéket ért el. A bioszintézis során 1000 egység G-penicillin szintetizálására 0,29 mg fenil-ecetsav volt szükséges. A fentiekben leírt módon készített fermentáció biokémiai paramétereinek alakulását az 1. számú táblázat szemlélteti. A fermentléből kinyert G-penicillin-káliumsó olvadáspontja (bomlik): 212-215“C hatóanyagtartalma (jodometrikusan): 97,2%. 2 1. sz. táblázat Kor óra pH szacharóz % oldott N Sörensen szerint mg/100 ml sejttömeg** % liter NE/ml st.tpt.* 6.20 0,52 59,5-2 6,15 0,65 42,2 18 10 6,05 0.25 44,3 22 18 6.15 0,10 46,7 27 26 6.60 0,14 52,1 31 34 6,75 0,20 55,5 41 1 950 42 6.90 0,18 42,4 39 3000 50 6.90 0,16 60,6 50 4 800 58 6,80 0,19 68,8 43 6900 66 6.70 0,25 78,4 42 8 850 74 6.75 0,30 72,3 45 11 200 82 6,60 0,32 75,7 41 13 200 90 6.55 0.28 81,2 38 ' 13 800 98 6,65 0.35 68,6 44 15400 104 6,80 0,35 50,5 46 17 000 112 6,65 0,33 72,7 45 18 750 120 6.70 0,36 38,3 43 20100 128 6,70 0,40 65,3 44 21 600 136 6,75 0,35 73,2 42 23 900 140 6,65 0,45 68,8 38 24 600 * steril táptalaj ** a fermentációs tenyészet térfogatára vonatkoztatva 2. példa : A LAR 0190 jelzésű Pénicillium chrysogenum törzsből 80 liter előfermentációt készítettünk. Az előfermentációt 630 liter alaptáptalajba oltottuk, melynek összetétele a következő volt : (Földi)mogyoróliszt 2,5 % Kukoricalekvár 100%-os 1,0 % Nátrium-tioszulfát 0,06% Kalcium-karbonát 0,78% Napraforgóolaj 0,28% A fermentációs paraméterek a következők voltak:- felhasznált energia: 2,2 kW/m3- hőmérséklet : 25 *C- belső nyomás: 1,019 * 10® Pa A fermentációt 140 órán át futtattuk 25 *C-on. Ezalatt összesen 11,3% szénforrást adagoltunk a tenyészethez (a szénforrás 11%-a napraforgóolaj, 89%-a szaharóz volt). A fermentáció 0 órás korában 0,6% fenoxi-ecetsavat adagoltunk a fermentléhez. 108 órás korban, . minthogy a fenoxi-ecetsav-tartalom 0,05% alatti értékre csökkent, további 0,30% fenoxi-ecetsavat adagoltunk a fermentléhez. A pH szabályozására ammónium-szulfátot,’ammónium-hidroxidot és ammónium-hidroxiddal párhuzamosan 1 :2 arányban kálium-hidroxidot alkalmaztunk, úgy adagolva a fenti anyagokat, hogy a pH 6,2-6,9; az oldott nitrogén-tartalom 0—105 órás korban 20-75 mg/100 ml érték között maradjon. A beadott ammónium-szulfát mennyisége 0,78%, a beadott ammónium-hidroxid mennyisége 0,16, a beadott kálium-hidroxid mennyisége 0,24% volt a fermentáció végtérfogatára vonatkoztatva. A fermentié V-penicillin tartalma 140 órás korban 25 700 NE/ml értéket ért el. A bioszintézis során 1000 egység V-penicillin szintetizálására 0,31 mg fenoxi-ecetsav volt szükséges. A fentiekben leírt módon készített fermentáció biokémiai paramétereinek alakulását a 2. számú táblázat szemlélteti. A fermentléből kinyert V-penicillin-sav olvadáspontja (bomlik): 119-125 °C, hatóanyagtartalma (potenciometrikusan): 97,8% 2. sz. táblázat Kor óra pH szacharóz * oldott N Sörensen szerint mg/100 ml sejttömeg** % titer NE/ml st.tpt.* 6,25. 0,38 74,5 14 4 6,30 0,50 61,2 15 12 6,00 0,18 50,7 18 20 6,35 0,08 44,0 22 28 6,50 0,28 33,6 38 36 6,65 0,10 42,0 36 3 100 44 6,70 0,12 26,6 43 4 800 52 6,85 0,17 43,4 45 6 600 60 6,65 0,20 32,1 45 9400 68 6,70 0,18 48,0 44 11 100 76 6,60 0,25. 52,7 41 13000 84 6,90 0,20 50,4 43 15 200 92 6,75 0,23 60,1 43 17 250 100 6,80 0,30 58,0 47 19 500 108 6,75 0,30 65,0 43 21 300 116 6,70 0,32 .70,0 40 22 700 124 6,85 0,35 72,7 41 23 500 132 6,85 0,40 68,5 42 24810 140 6,90 0,40 76,0 40 25 700 * steril táptalaj, ** a fermentációs tenyészet térfogatára vonatkoztatva. 3. példa: Az URCM jelzésű Pénicillium chrysogenum törzsből 80 liter előfermentációt készítettünk. Az I 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
