189222. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, fertőző bronchitis elleni vakcina előállítására
1 189 222 2 A találmány tárgya eljárás új, élő vagy inaktivált, fertőző bronchitis elleni vakcina előállítására. . Egy madár-eredetű korona-vírust tartanak a fiatal és felnőtt csirkék akut, erősen fertőző légúti betegsége okozójának, amely betegséget légcsőzörejek, köhögés, tüsszögés és orrfolyás jellemez. A betegségnek, amelyet fertőző bronchitisnek (FB) neveznek, nagy a halálozási arányszáma, főleg fiatal csirkékben, ezen kívül a vesére és a szaporító traktusra is hathat, az utóbbinak a károsodása a tojástermelés csökkenését eredményezheti tojó- és tenyésztyúkoknál. A tojáshozam-csökkenés több esetben bélgyulladással is társul, amely hasmenésben jelentkezik. A csirkét tekintik az FB vírus (FBV) egyetlen természetes gazdaszervezetének, de nemrégiben a vírust izolálták pulykákból is. A madár-eredetű FBV-n kivül a pulykák koronavírusos bélgyulladásának okozóját (CET, kékcomb-betegség) írták le, mint egy másik madár-eredetű koronavírus-fajt. Az FB visszaszorítására a baromfiaknál nagy mennyiségben használnak vakcinákat. A pecsenyecsirkék, a fiatal leendő tojók és tenyésztyúkok immunizálása jórészt élő, legyengített vakcinák alkalmazásán alapul. Az élő vakcina vírus törzseket immunogén tulajdonságain kívül antigén spektrumuk és csökkentett patogenicitásuk alapján választják ki. A vakcinákat aszerint írják le, vajon egy meghatározott szerotípust - mind Connecticut (pl. Connecticut Isolate A 5968) vagy Massachussets (pl. Baudette Type IBV 421) - tartalmaznak, amelyek csak a homológ típus ellen védenek, vagy pedig ezek egy szélesebb antigén-spektrummal bíró meghatározott vírus törzsből - mint pl. H törzsből - származó vakcinák, A különböző FB szerotípusok kombinálását élő vakcinákban szintén megpróbálták, valószínűleg a kölcsönös interakció eredményeképpen azonban az így nyújtott védelem a megfelelő szerotípusok ellen nem volt optimális. Úgy tűnik tehát, hogy ezeken a gyakran használt FB vírus törzseken, vagy ezek kombinációján alapuló FB vakcinák nem eredményeznek teljes immunizálást az FB kitörése ellen. A jelen találmány szerinti új FB vakcinák azonban meglepő módon sokkal hatásosabbak a fertőző bronchitis ellen. Ezek az új vakcinák azzal jellemezhetők, hogy olyan fertőző bronchitis vírusokból származnak, amelyek spontán hemagglutinálják a csirke eritrocitákat. A csirke eritrocitákat spontán hemagglutináló tulajdonságú FB vírusok találhatók különböző ismert szerotípusok FBV-k között is, pl. Massachussets típusúak vagy Connecticut típusúak között, de új szerotípusú FBV-k között is. A csirke eritrocitákat spontán hemagglutináló vírus törzsek immunizáló potenciálja meghaladja az azonos szerotípushoz tartozó, de az eritrocitákat spontánul nem agglutináló vírusok immunizáló potenciálját. Ezen kívül azt is felfedeztük, hogy a csirke eritrocitákat spontán agglutináló FB vírusok kombinációjából származó FB vakcinák jobb védelmet nyújtanak, mint a csirke eritrocitákat nem agglutináló, különböző szerotípusokból származó FBV törzsek kombinációján alapuló vakcinák. Ezen kívül a találmány szerinti FB vakcinák akkor is kiváló immunizáló tulajdonságokat mutatnak, amikor olyan vakcinákkal kombinálják, amelyek egyféle vagy többféle nem-hemagglutináló FB vírust tartalmaznak, valamint akkor is, ha másféle vírusokat tartalmazó vakcinákkal kombinálják, mint pl. a Marekbetegség, New-Castle betegség vagy tojáshozam-csökkentő betegség (egg drop disease) vakcináival. A találmány szerinti FB vakcinák származhatnak pl. új, csirke-eritrocitákat spontán hemagglutináló tulajdonságú FB vírus törzsekből, amely törzsek a Központi Állatorvosi Laboratóriumban (Central Veterinary Laboratory, New Haw at Weybridge, Nagy-Britannia) VLO 10 110/AVI/3; VLO 10 110/AVI/4; VLO 10 110/AVI/5; VLO 10 110/ AVI/6 és VLO 10 11Ö/AVI/7 számon vannak letétbe helyezve, ezek a belső jelölés szerinti D 274, D 1466, D 580, 246 G és 249 G törzseknek felelnek meg. Az új FBV törzsek különböző szerotípusokhoz tartozóknak mutatkoztak. A 246 G és D 580 törzsek Massachussets, illetve Connecticut típusúak. A D 274, 249 G és D 1466 törzsek új, eddig le nem irt szerotípusokhoz tartoznak. Az 1. Táblázatban foglaljuk össze a vírus semlegesítési vizsgálat (VN) eredményeit, amelyet tojásban végeztünk, állandó szérumot, hígított vírus módszert használva; az eredmények megmutatják, hogy az új D 274 és D 1466 izolátumok nem tartoznak sem a Massachussets szerotípusba - amelyet ezekben a kísérletekben a holland H52 törzsből származó vakcina képviselt -, sem a H törzs vakcinákat magába nem foglaló észak-amerikai FB szerotípusok valamelyikébe. A D 274 hemagglutináló törzset az új D 207 szerotípusba lehet osztályozni, míg a D 1466 törzs a D 212 szerotípusba tartozik. A 249 G törzs ugyanabba a szerotípusba tartozik, mint a D 274 törzs. Ez megmutatkozik a 2. Táblázatban található kereszt-semlegesítési kísérletekből [a csirkeembrió fibroblaszt sejtekben (CEF) mért tarfoltcsökkenési tesztet alkalmazva], a kereszt-semlegesítési kísérleteket az új izolátumok és a különleges patogén-mentes (SPF) csirkék szérumából preparált fajlagos antiszérum között végezve. A vakcinálás fontosságát az új D 274, 249 G és "6 1466 FBV törzsek ellen illusztrálja ezeknek a szerotípusoknak igen nagy gyakorisága a baromfiudvarokból származó izolátumokban. A 3. Táblázatban található az új szerotípusú FB vírusok elleni antitestekkel rendelkező csapatok számai (3 A) és az a gyakoriság, amellyel a megfelelő szerotípusú FB vírusok izolálhatok voltak a csapatokból (3 B). Az új vírusok alább következő jellemző tulajdonságai alapján ezek madár-eredetű korona-vírusként voltak meghatározhatók: 1. RNS-típusú nukleinsavakkal rendelkeznek; 5- fluor-dezoxi-uridint a vírus csirke-embrió vese sejt tenyészetéhez (CEK) adva nem befolyásolja jelentősen a vírus replikációját. 2. A vírusok érzékenyek a zsíroldószerekre; a fertőzött amnion-allantoisz folyadék (AAF), amely embriót tartalmazó SPF-csirketojásból vírusok 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
