189222. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, fertőző bronchitis elleni vakcina előállítására

1

189 222

2

szaporításával nyerhető, kezelése kloroformmal a fertőzési titer jelentős csökkenését okozza. Ez az olyan burokkal ellátott vírusok tulajdonsága, amelyek eszenciális zsírokat tartalmaznak, ez pedig szintén a madár-eredetű korona-vírusokra jellem- 5 ző.

3. Fertőzött AAF-ből származó, ultra-centrifugában sűrített vírus-készítmény elektronmikroszkópos vizsgálata azt mutatja, hogy a vírus-részecskék alakja és mérete a koronavírusokra jellemző, és 10 jellegzetes kidudorodások (15-20 nm hosszú) találhatók a felületükön. A részecskék átmérője a dudorokat nem számítva 75-120 nm.

4. Gél-diffúziós vizsgálatot alkalmazva kimutatható volt, hogy ezek a vírusok általában tartalmaz- 15 nak antigént ismert madár-eredetű korona-vírusok ellen, pl. Baudette FBV referencia törzs ellen. Más madár-eredetű vírusok ellen viszont általában nem volt kimutatható antigén.

Az új törzsek ellen készített fajlagos antiszéru- 0 mok az SPF csirkékben nem reagálnak olyan antigénekkel, amelyek madár-eredetű vírusökból, de nem madár-eredetű korona-vírusokból készültek.

5. Az új tôrzsçk sokszorozódnak a fertőzött sejtek citoplazmájában. Megfelelő in vitro rendszerek 25- embriót tartalmazó SPF-csirke-tojások (célszerűen az allantoiszon keresztül fertőzve)- légcső-szövet tenyészet- csirke-sejtek- csirke-embrió sejtek (célszerűen CEK sejtek) 30

A fenti adatok megfelelően behelyezik ezeket az új vírusokat a madár-eredetű korona-vírusok közé, és jól elkülöníthetők a más madár-eredetű vírusoktól, mint pl. a madár-influenza-vírustól, a Newcastle vírustól, a REV-vírustól, az adenovírustól, leukózis-vírustól, retikoendoteleózis vírustól, madár-enkefalomielitisz-vírustól, herpesz-vírusoktól, ez utóbbiba beleértve a fertőző laringotraceitis vírust, a Marekbetegség vírusát, a galamb- és pulyka herpesz vírusokat és a fertőző nyáktömlő betegség (bursitis) vírusát.

A jelen találmány a madár-eredetű korona-vírusokat - amelyek a fentebb leírt spontán hemagglutinációt mutatják - tartalmazó vakcinák készítésével foglalkozik.

A vírust embriót tartalmazó SPF csirke-tojásban növeszthetjük, vagy valamilyen sejt-tenyészetben, el őnyösen madár-szövettenyészetben.

Ha élő, legyengített vakcinát kell készíteni, a legyengitést a vírus izolátumok adaptálásával lehet végrehajtani az embriót tartalmazó tojáshoz vagy sejt-tenyészethez (előnyösen CEK sejtekhez) és a vírust ezeken a tenyészeteken pl. 10-200-szor kell passzálni. A biztonságos élő vakcina termelésének egy másik megközelítése egy madár-eredetű korona-vírus megfelelő kiónjainak kiválasztása és tenyésztése, feltéve, hogy ezek még rendelkeznek a spontán agglutináció képességével.

1. táblázat

Vírus

i

Szérum -* J 97

J 609

Connecticut

Florida

J MK

3896

J 97

2: 6,2

0,7

1,2

1,4

0,7

1,7

J 609

< 2,9

4,9

< 2,9

< 2,9

< 2,9

3,6

Connecticut

2,1

2,1

6,1

6,1

1,8

3,6

Florida

0,6

1,3

> 4,2

^ 4,2

0,5

2,6

JMK

2,8

1,5

2,3

2,3

^ 6,3

2,8

D-3896

< 0,8

0,9

1,5

1,5

<: 0,8

> 6,6

D-207

0,5

0

0,5

0,5

< 0,3

2,6 (

D-212

0

1,2

1,0 •

1,0

0,3

2,3

H-52

1,6

2,8

2,8

2,8

1,1

1,8

D-274

2,2

2,7

3,7

3,7

2,8

4,2

D-1466

ND

ND

ND

ND

ND

1,8

D-3128

ND

ND

ND

ND

ND

1,5

D-752

—

—

—

—

1,9

1. Táblázat (folytatás)

Vírus

l

Szérum -» 207

212

H 52 (Mass.)

3128

274

1466

J 91

0

0

0,7

—

^ 1,5

^ 1,9

J 609

< 2,9

^ 2,9

5,1

—

<; 2,8

^ 2,8

Connecticut

1,6

^ 1,2

. 4,1

—

< 2,5

< 2,6

Florida

1,0

0

1,3-, -3,0

< 2,3

JMK

1,3

1,3

1,2

—

—

■---D-3896

1,9

< 0,3

< 0,7

3,2

—

—

D-207

^ 5,3

• 1,3

1,4

1,4

—

—

D-212

0,5

5,3

0,5

1,4

—----'

H-52

U

1,1

> 5,3

—

—

D-274

5,0

< 1,5

< 1,6

3,4

> 5,9

3,5

D-1466

1,2

4,9

0,5

D-3128

0

0

0

6,4

—

—

D-752

1,5

1,3

1,5

1,9

2,0

3,9

ND = nem mutatható ki 3