189207. lajstromszámú szabadalom • Eljárás foszfortart L-prolinn-származékok előállításásra
1 189 207 2 2,4 g (5,47 mmól) (S)-{etoxi-[3-fenil-2-(4-toluolszulfonil-amino)-propil]-foszfinil}-ecetsav, 2,4 g (25,5 mmól) fenol és 25 ml 48%-os vizes hidrogénbromid oldat elegyét 2 óra hosszáig forraljuk viszszafolyó hűtő alatt. A lehűtött elegyet 50 ml vízzel hígítjuk, és 2 x 25 ml etil-acetáttal mossuk. A vizes fázist szárazra pároljuk, a maradékot 25 ml vízzel oldjuk, és ismét bepároljuk. Ezt a műveletet még kétszer megismételjük. Végül a halványsárga maradékot vízzel oldjuk, és hidrogénciklusú AG 50W-X2 töltetű oszlopba (50 ml ágytérfogat) öntjük, és először vízzel eluáljuk (6 x 50 ml frakciót szedünk), majd 5% piridint tartalmazó vízzel (6 x 50 ml frakciót szedünk). A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és szárazra pároljuk. A szilárd maradékot acetonitrillel eldörzsölve 1,10 g (S)-[(2-amino-3-fenil-propil)-hidroxi-foszfinil]-ecetsavat kapunk fehér, kristályos szilárd anyagként, amelynek olvadáspontja 235 °C (bomlás). [a]” = +2,2° (c=l,00; 1 n sósavoldat). Rf = 0,37 (izopropanol; cc. ammónium-hidroxid oldat : viz = 7:2:1). Elektroforézis: ph 6,5; 2000 V; 60 perc; egyetlen folt + 5,3 cm; láthatóvá tétel karboxil-reagenssel vagy ninhidrinnel. Az elemanalízis eredményei a CnH16N04P öszszegképletre: számított: C% 51,36; H% 6,27; N% 5,45; P% 12,04, mért: C% 51,31; H% 6,28; N% 5,55; P% 12,0. J) (S)-{[2-(Benzoil-amino)-3-fenil-propil]-hidroxi-foszfinil}-ecetsav. 1.0 g (3,89 mmól) (S)-[(2-amino-3-fenil-propil)hidrpxi-foszfinil)-ecetsav 6 ml dioxán és 3 ml víz elegyével készített szuszpenzióját jeges fürdőben lehűtjük, és 2,0 ml (14,5 mmól) trietil-aminnal elegyítjük. Tiszta oldatot kapunk. Az elegyhez utána 0,55 ml (4,74 mmól) benzoil kloridot csepegtetünk 5 perc alatt. Egy óra hosszáig 0 °C-on keverjük, utána az elegyet tömény sósavoldattal pH 1-re savanyítjuk, és az oldószer nagyrészét vákuumban eldesztilláljuk. A maradékot vízzel eldörzsöljük, a fehér szilárd anyagot kiszűrjük, és vízzel alaposan átmossuk. A szilárd anyagot levegőn szárítjuk, dietil-éterrel háromszor eldörzsöljük a benzoesav nyomainak eltávolítására, és végül vákuumban foszfor-pentoxid felett szárítjuk, így 1,2 g (S)-{[2-(benzoil-amino)-3-fenil-propil]-hidroxi-foszfinil}ecetsavat kapunk, amelynek olvadáspontja 105-107 °C. [a]” = ~27,8° (c=l,00; metanol). Rf = 0,56 (izopropanol: cc. ammónium-hidroxid : víz = 7:2: 1). Az elemanalízis eredményei aC18H20N05P• 1,0 H20 összegképletre: számított: C% 56,99; H% 5,85; N% 3,69; P% 8,16, mért: C% 56,89; H% 5,80; N% 3,95; P% 7,9. g) (S)-1 -[{[2-(Benzoil-amino)-3-fenil-propil]-hidroxi-foszfinil}-acetil]-L-prolin-benzil-észter. 1.0 g (2,77 mmól) (S)-{[2-(benzoil-amino)-3-fenil-propil]-hidroxi-foszfinil}-ecetsav 15 ml vízmentes tetrahidrofuránnal készített oldatát 0 °C-on (jeges fürdő) argongáz alatt 0,48 g (2,96 mmól) N,N'karbonil-diimidazollal reagáltatjuk. Az elegyet 50 perc múlva 1,2 ml (8,67 mmól) trietil-aminnal elegyítjük, és hozzáadunk 0,7 g (2,9 mmól) L-prolinbenzil-észter-hidrokloridot, hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni, és éjszakán át keverjük. A reakcióelegyet etil-acetáttal és 5%-os kálium-hidrogénszulfát oldattal rázzuk össze. Az etil-acetátos fázist alaposan mossuk 5%-os kálium-hidrogén-szulfát oldattal, 5%-os nátrium-dihidrogén-foszfát oldattal (pH 4,5 puffer) és telített nátrium-klorid oldattal, majd nátrium-szulfáton szárítjuk, és bepároljuk. Az 1,24 g nyersterméket 60 g szilikagéllel töltött oszlopon ecetsav : metanol : diklór-metán (1 : 1 : 26) eluálószerrel kromatografálva tisztítjuk, így 1,12 g (S)-l-[{[2-(benzoiI-amino)-3-fenilpropil]-hidroxi-foszfinil}-acetil]-L-prolin-benzilésztert kapunk fehér habként. Rr — 0,29; (ecetsav : metanol : diklórmetán = 1:1: 20); Rf = 0,76; (izopropanol : tömény ammóniumhidroxid : víz). h) (S)-l-[{[2-(Benzoil-amino)-3-fenil-propil]hidroxi-foszfinil)-acetil]-L-prolin-dilítiumsó. 1,05 g (1,92 mmól) g) pont szerinti észter-származék 60 ml vízmentes metanollal készített oldatához 0,3 g 10%-os palládiumosszén katalizátort adunk, és Parr-készülékben 2,5 óra hosszáig hidrogénezzük 3,5 bar (50 psi) nyomáson. Az elegyet Celiten át szűrjük, és szárazra pároljuk. A 0,87 g maradékot 3 ml 1 n lítium-hidroxid oldattal és 4 ml vízzel oldjuk, majd 40 g lítium-ciklusú AG50W-X8-cal töltött oszlopon (40 ml ágytérfogat) vízzel eluálva kromatografáljuk. A kívánt terméket tartalmazó frakciókat egyesítjük, és liofilizáljuk. A 0,8 g nyers liofilizátumot 200 ml ágytérfogatú, 2,54 cm (1 inch) átmérőjű, Hp-20 töltetű oszlopon 100% víztől 100% acetonitrilig lineáris gradiens módszerrel 5 ml/perc átfolyási sebességgel aluálva kromatografáljuk; 5 ml-es frakciókat szedünk. A 82-96. számú frakciókat egyesítjük, bepároljuk, vízzel oldjuk, millipore szűrőn szűrjük, és liofitizálva 0,71 g (S)-l-[{[2-(benzoil-amino)-3- fenil-propil]-hidroxi-foszfinil}-acetil]-L-prolin-dilítiumsót kapunk. [°]d = -63,8° (c = 1,12; metanol). R, = 0,5 (izopropanol : tömény amóniumhidroxid : víz = 7 : 2 : 1). A 6,5 pH-n, 2000 V feszültséggel, 40 percig végzett elektroforézis egyetlen foltot ( + 4,8 cm) mutat karboxil-reagenssel láthatóvá téve. Az elemanalízis eredményei a C23H25N206PLi2 1,4 H20 összegképletre: számított: C% 55,75; H% 5,65; N% 5,65; P% 6,25, mért: C% 55,67; H% 5,45; N% 5,52; P% 6,30. 2. példa (S)-1 -[{[2-(Benzoil-amino)-4-metil-pentil]-hidroxi-foszfinil}-acetil]-L-prolin-dilítiumsó. a) 4-Toluolszulfonsav-[(S)-4-metil-2-(4-toluol-szulfonil-amino)-pentil]-észter. 5 10 15 20 25 30 '35 40 45 50 55 60 65 5
