189127. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az arginin-vazopresszin antidiuretikus és/vagy vazopresszor hatását antagonizáló új oktapeptidszármazékok előállítására
1 189 127 2 62,4%, op.: 183-185 °C; R,<E) = 0,38; R,(D) = 0,41; [a]o = - 32,9° (c = 1, dimetil-formamid). Aminosav-analizis: Tyr: 0,97; Phe: 1,02; Glu: 1,05; Asp: 1,01; Cys(Bzl): 0,98; Pro: 1,04; Arg: 0,98; Gly: 1,00; NH3. 3. példa [ l-($-Merkapto~$,$~ciklopentametilén-propionsav), 2~(0-metil)-tirozin]-arginin-vazopresszin A) módszer Nonapeptid-amidból kiindulva 170 mg (0,114 mmól), az 1. példában leírt módon kapott, védett nonapeptid-amid 400 ml, nátriumon szárított és kétszer desztillált ammóniával készült oldatát az ammónia forráspontján keverjük, és az oldatba beletartunk egy fém-nátriummal töltött, kis átmérőjű üvegcsövet. Az elegyet addig keverjük, míg az oldatban 30 másodpercig megmarad a világoskék szín [lásd duVigneaud, J. Am. Chem. Soc., 76 (1959), 3115]. Ezután a kék szín eltüntetése céljából az elegyhez hozzáadunk 0,4 ml ecetsavat, majd az oldószert ledesztilláljuk. A maradékot feloldjuk 800 ml, 0,2%-os, vizes ecetsav-oldatban, majd az oldat pH-ját 2 mólos ammónium-hidroxid-oldattal 7,5-re állítjuk. Az oldathoz keverés közben, kis részletekben, kis fölöslegben vett kálium-ferricianid-oldatot [0,01 mólos oldat, 11,4 ml, Hope és munkatársai, J. Biol. Chem., 237 (1962), 1563]. Ezután a sárgaszínű oldatot további másfél órán át keverjük, majd hozzáadunk 10 g nedves súlyú, klorid-formában lévő BioRad AG-3 anioncserélő gyantát, és az elegyet további 1 órán át keverjük. Ezután a szuszpenziót lassan átszűrjük 80 g nedves súlyú gyantából készült szűrőágyon, és a szűrőágyat 300 ml, 0,2%-os, vizes ecetsav-oldattal mossuk. Az egyesített szűrletet és mosófolyadékot fagyasztva szárítjuk. Az így kapott, 1386 mg súlyú, porszerű anyagot egy 110 x 2,7 cm méretű, Sephadex G-15 oszlopon sómentesítjük, az oszlopot 50%os, vizes ecetsav-oldattal 4 ml/óra sebességgel, Manning és munkatársai [J. Chromatog., 38 (1968), 396] módszerével eluáljuk. Az elutumot frakciókban gyűjtjük, és a frakciók abszorpcióját 280 nm-nél mérjük. A fő csúcsot tartalmazó frakciókat egyesítjük és fagyasztva szárítjuk. Az így kapott, 55,5 mg súlyú maradékot újabb gélszűréssel tisztítjuk, egy 100 x 1,5 cm méretű Sephadex G-15 oszlopon, az oszlopot 0,2 mólos, vizes ecetsavoldattal, 2,5 ml/óra sebességgel eluáljuk. Ily módon a peptidet egyetlen csúcs formájában kapjuk (a 280 nm-nél végzett abszorpciómérések alapján). A megfelelő frakciókat fagyasztva szárítva 49 mg (hozam: 37,3%) cím szerinti vazopresszin-analógot kapunk. RÍ(E) = 0,19; R,(F) = 0,30; [a]n = -59,6° (c = 0,19, 1 mólos ecetsav-oldat). Aminosav-analízis: Tyr: 0,81; Phe: 1,01; Glu: 1,04: Asp: 0,98; Pro: 1,04; Arg: 0,95; Gly: 1,00; NH3: 3,10. A Moore [J. Bioi. Chem., 238 (1963), 235] módszerével, a peptidet perhangyasavval oxidálva, maid ezután hidrolizálva kapott Cys(03H)-GIyarány: 1,03 : 1,00. B) módszer A cil-ok tapep tidböl k Undid va 160 mg (0,107 mmól) acil-oktapeptidből kiindulva, és azt a fenti A) módszerben leírt módon kezelve 64 mg (hozam: 51,7%), az A) módszerrel kapott terméktől vékonyréteg-kromatográfiásan nem megkülönböztethető termékhez jutunk; [cOd = “59,1° (c = 0,5, 1 mólos ecetsav-oldat). Aminsav-analízis: Tyr: 0,80; Phe: 1,02; Glu: 1,02; Asp: 0,98; Pro: 1,03, Arg: 0,96; Gly: 1,00; NH3: 3,05. A peptidet perhangyasavval oxidálva, majd ezután hidrolizálva a Cys-(03H)-Gly-arány: 1,02:1,00. 4. példa 11 - ( ß-Merkapto-ß, ß-ciklopentametilén-propionsav) ]-arginin-vazopresszin 173 mg (0,111 mmól) acil-oktapeptidből kiindulva, és azt a 3. példa A) módszerében leírt módon kezelve 66 mg (hozam: 52,5%) megfelelő cím szerinti analógot kapunk; R((E) = 0,19, R,(F) = 0,43. [a]p = —58,7° (c = 0,5, 1 mólos ecetsav-oldat). Aminosav-analízis: Tyr: 0,96; Phe: 0,98; Glu: 1,01; Asp: 1,01; Pro: 1,05; Gly: 1,00; NH3: 2,95. A peptidet perhangyasavval oxidálva, majd ezután hidrolizálva a Cys(03H)-Gly-arány: 1,01 : 1,00. 5. példa [ l-($~Merkapto-$#-ciklopentametilén-propionsav), 2-(0-alkil)tirozin, 4-valin]-(L- és D-) -arginin-vazopresszin E vegyületeket a Manning és munkatársai [J. Med. Chem., 16 (1973), 975] és Kruszynski és munkatársai [J. med. Chem., 23 (1980), 364] által módosított, szilárd fázisú szintézissel állítottuk elő, e módszerrel kaptuk a megfelelő analógok köztitermékeit. E köztitermékeket ß-(S-benzilmerkapto)ß,ß-ciklopentametil6n-propionsawal (lásd Nestor és munkatársai fent idézett közleményét) kapcsoltuk, a kapcsoláshoz Bodanszky és munkatársai [J. Am. Chem. Soc., 81 (1959), 5688 és J. Org. Chem., 39 (1974), 444] módszerét használtuk, e kapcsoláshoz a p-nitrofenil-észtert, és segédanyagként hidroxi-benzotriazolt (lásd König és munkatársai fent idézett közleményét) alkalmaztunk. Az így kapott vegyületekről a védőcsoportot duVigneaud és munkatársai fent idézett közleménye szerint, cseppfolyós ammóniában nátriummal hasítottuk le. A kapott dimerkapto-származékokat Hope és munkatársai fent idézett közleményében leírt módon, kálium-ferricianiddal oxidativ úton ciklizáltuk. Az így kapott vazopresszin-analógokat kétlépcsős eljárásban, Sephadex G-15 oszlopon, gélszűréssel sómentesítjük és tisztítjuk, a Sephadex G-15 oszlopot 50%-os ecetsavval, majd 0,2 mólos i 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
