188955. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 koenzimet termelő fermentlé előállítására
.188 955 10 0,02-0,1 tf% hőkezelt kukoricalekvár oldatot, vagy 0,03-0,2 tf% hőkezelt kukoricamoslékot és 0,01-0,05 v% ammónium-hidrogén-karbonátot adunk, majd a kapott szakaszos termelő fermentlevet feldolgozzuk, végül v.) az ni.) félfolyamatos fenntartó és az iv.) szakaszos termelő lépéseket naponta megismételjük. A találmány tárgya eljárás Bï2 koenzimet és korrinoidokat (például III. faktort) termelő fermentlé új, mezofil, mertántermelő vegyes mikropopulációval végzett előállítására anaerob, szeptikus körülmények között ismert prekurzor(oka)t 15 és részben ismert tápanyagkomponenseket tartalmzó új tápközeg alkalmazása útján. Bár a találmány szerinti eljárásban a prekurzo„rok és a tápközeg egyes komponensei ismertek, a tápanyagok száma és aránya, valamint aB12 ko' 20 enzim előállításához szükséges tápanyagok menynyisége az ismert eljárásokhoz viszonyítva lényegesen kevesebb, tehát a fermentálásban alkalmazott tápközeg ezideig nem volt ismeretes. "A találmány szerinti fermentlé szárítva, vagy 25 feltárva állattakarmányok vagy takarmányadalé- ■ kok (premixek) készítésére használható fel, kívánt esetben B12 vitamin (cianokobalamin) készíthető belőle, mind humán-, mind állatgyógyászati cé-r_ lókra. 30 Ismeretes, hogy a B12 vitamin a fermentálás' soráh tenyésztett sejtekben nem szabad állapotban fordul elő, hanem olyan korrinvázas vegyületek (Bi2 koenzim) alakjában amelyekben a kor- 35 rinváz központi kobalt atomjához nem cianidcsoport, hanem dezoxi-adenozilcsoport kapcsolódik. Szabadalmi leírásunkban a hatóanyag kifejezés alatt a B12 koenzimjét és a III. faktort értjük [Barker és misai.: Biol. Chem. 235, 480 ( 1960)]. I Az inokulum „új steril tenyészetek kialakításához alkalmazott vírusoldat, mikroorganizmus, , sejtszuszpenzió vagy növényi szerv, szövet, vagy sejt [Straub, F: B.: Biológiai Lexikon II. változatlan lenyomat 287. oldal, Akadémiai 'Kiadó, Budapest (1978)]. Találmányunkban az inokulum anaerob, szeptikus, mezofil metántermelő vegyes mikropopulációt tartalmaz. 45 À prekurzor (előanyag) olyan künduló vegyület, amelyből a biológiai reakciók során alakul kf a végtermék. (ugyanott III. 437. oldal; például az 5,6-dimetil-benzimidazol, akobaít-kloridstb.) A tápközeg a mikroorganizmusok tenyésztésére szolgál, amely felvehető állapotban tartalmazza mindazon tápanyagokat, amelyekre a mikroorganizmusoknak a tenyésztés során szükségük van (például a metanol, az ammónium-hídrögém karbonát, a magnézium-klorid stb.). A továbbiak-50 55 ban a tápközeg kifejezés alatt a tápanyagokat és a prekürzorokat együttesen tartalmazó közeget értjük. A tápanyagok a mikropopuláció számára létfontosságú vegyi anyagok (például szén- és nitrogénforrás). A metanol szerepe találmányunkban kettős: a szintézis szénforrása, ezen túlmenően azonban biztosítja a vegyes mikropopuláció képződéséhez szükséges energiát is. A félfolyamatos fermentálás a fermentálás azon változata, amelyben a mezofil, metántermelő vegyes mikropopuláció képződése folyamatos, a fermentlé elvétele és vele párhuzamosan a tápanyagok beadagolása periodikusan, előnyösen naponta egy vagy két ízben történik. A B12 koenzim előállítására — jelentőségénél fogva’— számos fermentációs eljárás és feldolgozási technológia ismeretes. A fermentációk legnagyobb része aerob, steril eljárás, amelynek előnye, hogy fajlagosan több B12 koenzimet termelnek, hátrányuk viszont a lényegesen nagyobb önköltség, komplikáltabb berendezés és az elfertőződés veszélye. Az anaerob, szeptikus fermentációval bár fajlagosan kevesebb B12 koenzim állítható elő, de lényegesen egyszerű és olcsóbb körülmények között, ami mellett a fermentáció során melléktermékként képződő biogáz nagy fűtőértékű energiahordozó. A B12 koenzim bioszintézisét J. Florent és L. Ninet foglalja össze [H. J. Peppier és D. Perlman: Microbial Technology 2. kiadás, I. kötet (497-519)]. Ismeretes, hogy mintegy két évtizeddel ezelőtt a B12 koenzimet a szennyvíziszapban jelentkező ; tápanyagokból, az ott jelenlevő mikroorganizmusok útján fermentációs eljárással állították elő. Adott esetben a szennyvíziszapot különféle további tápanyagokkal egészítették ki. Az eljárásnak nagy előnye, hogy a fermentálás szeptikus körülmények között végezhető, hátránya viszont, hogy minden egyes fermentáláshoz nagymennyiségű szennyvíziszapot kell a szennyvíztelepről a fermentáló üzembe szállítani, a szenny. víziszap összetétele, baktérium populációja ingadozó volt és nem utolsósorban ezen esetekben a szennyvíziszapba „vad törzsek” ás kerülhettek, amelyek lehetetlenné tették egy stabil baktérium populáció kialakulását, helyesebben kialakítását. A 153 740 számú magyar szabadalmi leírás új eljárást ismertet a B12 koenzim anaerob, szeptikus előállítására, amelynek lényege, hogy megfelelő tápanyagokat tartalmazó tápközeghez csupán egy I ízben adnak szennyvíziszapot, majd legalább ötszöri átoltás után olyan vegyes mikropopuláció dúsul fel, amely már önmagában képes átvenni az inokulum szerepét és B,2 koenzimet termelni mintegy , 6—6,2 mg/1 fermentlé mennyiségben. 60 2
