188861. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új lipofil muranil- peptidek előállítására
1 188 86‘ 2 jük. Ugyanezen a hőmérsékleten végzett 8 órás keverés után ( = előaktiválás) hozzáadjuk 0,382 g (0,5 mmól) L - alanin - 2 - (í’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid és 0,07 ml (0,5 mmól) trietil - amin 12 ml olyan oldószereleggyel készített oldatát, amely kloroform - metanol - víz 65 : 25 : 4 térfogatarányú elegye. Szobahőmérsékleten (körülbelül 22 °C-on végzett 24 órás keverés után a reakció befejeződött.____ A reakcióelegyhez 60 mi etil-acetátot adunk, jégfürdőben végzett rövid keverés után az oldatlan részt leszűrjük és a szűrletet 65 ml vízzel elegyítjük. A könnyen illő komponenseknek vákuumban való elpárologtatása után visszamaradó vizes oldatot keverés közben Amicon ultraszűrő cellában Amicon YM 10 membránon keresztül dializáljuk, 200 ml vízzel, 100 ml 0,1 mólos nátrium - foszfát - ouffer — 0,1 mólos nátrium - klorid - oldattal 'pH = 7) és végül 425 ml vízzel szemben. A belső dializátumot Millipore szűrőn (0,45 p) szűrjük és íagyasztva szárítjuk. A kapott N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (1’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsó 3 mól vizet tartalmaz. A vegyület ugyanazon fizikai azonosítási adatokkal rendelkezik, mint a 13. példa szerint előállított vegyület. 16. példa a) 1 mmól 1 - a - benzil - N - acetil - 4,6 - izopropilidén - muraminsav, 0,9 mmól L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (1\2’) - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil - etil - amidhoz 15 ml dimetil-formamidból, 10 ml tetrahidrofuránból és 2 ml piridinből képezett keverékben oldva ’,2 mmól diciklohexil - karbodiimidet és 1,3 mól N - hidroxi - szukcinimidet adunk. Szobahőmérsékleten 24 óra múlva befejeződik a reakció. Ezután néhány csepp vizet adunk a reakciókeverékhez, a képződött diciklohexil - karbamidot leszívatjuk és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot kromatográfiásan tisztítjuk, Merckféle Kieselgelen, kloroform és metanol7 : 3 arányú keverékének alkalmazásával. A kívánt végterméket tartalmazó frakciók vékonyréteg lemezen (Kieselgel, Merck) pozitív reagálnak a V. E. Vaskovsky és £, Y. Kostetsky szerinti foszfátreagenssel [(J. Lipid. Res. 9, 396 (1968)] és pozitívan reagálnak 2n kénsavval is, melegítésre (a cukor barna színeződése). A kapott frakciókat bepároljuk, majd a védőcsoportok eltávolítására először 12 ml jégecetből és 8 ml vízből képezett elegyben 1 órán keresztül 50 °C-on tartjuk, majd szobahőmérsékleten 10 %os, szénre felvitt palládium alkalmazásával normál nyomáson hidrogénezzük. 20 óra múlva az a - benzil - csoport lehasad; a katalizátort leszűrjük és a szűrletet vákuumban szirupsűrűségűre bepároljuk. Az N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil -sn - glicero - 3’ - foszforil - etil - amid pirimidiniumsójának szirupszerű maradékát kapjuk, amit 150 ml vízben oldunk. A vizes oldatot teflonból készült Milliporeszűrőn (pórusnagyság 5p) szűrjük. A szűrletet egy kevert Amicon ultraszűrő cellában Amicon YM 10 membránon keresztül diaszűrési eljárással először vízzel, (400 ml) ezután 0,1 mólos nátrium-foszfát puffer — 0,1 mólos nátrium - klorid - oldattal pH = 7 (200 ml) és végül vízzel (850 ml) szemben dializáljuk. A belső dializátum, ami az N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanil - 2 - (l’,2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - amid - nátriumsót tartalmazza, Milliporeszűrőn (pórusnagyság 0,45 pm) szűrjük és fagyasztva szárítjuk. A kapott vegyület fizikai állandói megegyeznek a 13. példa szerint előállított termékével. 17. példa 1,245 g (2 mmól) N - acetil - 1 - a - O - benzil -4,6 - di - O - izopropilidén - muramii - L - alanil - D - izoglutamint, 1,500 g (2 mmól) glikolsav - 2 - (1\2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil - etil - amidot és 0,279 ml (2 mmól) trietil-amint 12 ml, dimetil-formamid és kloroform (3 : 1) térfogatarányú elegyében oldunk. 0,613 g (4 mmól) 1 - hidroxi- benztriazol és 0,244 g (2 mmól) 4 - dimetil - amino- piridin hozzáadása után 0,454 g (2,2 mmól) diciklohexil - karbodiimidet adunk hozzá, és 24 órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük. A kivált diciklohexil - karbamidot leszűrjük, és a szűrletet szárazra pároljuk. A védőcsoportok eltávolítására a maradékot 40 ml 80 %-os ecetsavval felvesszük, az oldatot először 1 órán keresztül 60 °C-on tartjuk, majd szobahőmérsékleten 10 %-os, szénre felvitt palládium jelenlétében normál nyomáson hidrogénezzük. 24 óra után az a - benzil - csoportot lehasítottuk. A katalizátort leszűrjük és a szűrletet bepároljuk. A képződött trietil-ammóniumsót kétszer desztillált vízzel felvesszük és szokásos módon, pufferolt nátrium - klorid - oldattal szemben pH = 7-nél, majd vízzel szemben végzett dialízissel nátriumsóvá alakítjuk át. A Millipore-szűrőn (pórusnagyság 0,45 pm) átszűrt cellatartalom fagyasztva szárítása után N - acetil - muramii - L - alanil - D - izoglutaminil - y - oximetilkarbonil - 2- (1\2’ - dipalmitoil - sn - glicero - 3’ - foszforil) - etil - etilamidot kapunk nátriumsója alakjában, iaza, poralakú termékként. A vegyület azonos a 14. c. példa szerint előállított vegyülettel. 18. példa 2,50 g (2,5 mmól) 1,4,6 - O - tribenzil - muramii- L - alanil - D - izoglutaminil - L - alanin - 2 - (sn- glicero - 3’ - foszforil) - etil - amidot 20 ml, vízmentes piridin és metilén-klorid (4:1, térfogatarányú) elegyében oldjuk. Hozzáadunk 0,061 g (0,5 mmól) 4 - dimetil - amino - piridint (DMAP), 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 16
