188709. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cedfalosporin-metilészterek enzimes dezészterezésére
1 188 709 2 12. példa 5 liter térfogatú, keverővei és a táptalaj felülete alá bevezetett levegőcsővel felszerelt tankfermentorban tenyésztünk. Az alábbi összetételű táptalajt használjuk : ammónium-klorid 0,2 g magnézium-szulfát • 7 H20 0,5 g dikálium-hidrogén-foszfát 2,0 g kalcium-klorid • 2 H20 0,2 g cink-szulfát ■ 7 H20 0,016 g kálium-klorid 0,2 g kobalt-klorid • 6 H20 0,0004 g vas-szulfát • 7 H20 0,004 g glükóz 10 g víz 1000 ml-re kiegészítve A táptalaj pH-ját sterilezés előtt foszforsavval 7,0-ra állítjuk be, majd annyi szűrővel előzőleg sterilizált glükózt és ammónium-kloridot adunk, hogy beálljon a megfelelő koncentráció. 3 liter fenti összetételű táptalajt adunk az 5 liter térfogatú fermentorba, majd automatikus pH- szabályozással 0,5 normál ammónium-hidroxidoldat adagolásával 6,95-ön tartjuk a táptalaj pH- ját. A táptalajon 1,5-2 liter/perc térfogatnyi steril levegőt buborékoltatunk át, és - ha a habzás ezt megkívánja — kevés szilikon-alapú habzásgátlót csepegtetünk hozzá, ^ 93 órán át folytatjuk a fermentációt; ezalatt 300 ml 20 %o-os glükóz-oldat és 200 ml 0,5 mólos dikálium-hidrogcn-foszfát-oldat adagolása szükséges. A táptalaj hőmérsékletét az egész fermentáció során automatikus szabályozással 30 °C-on tartjuk. A fermentáció 22., 45., 69. és 93. órájában mintákat veszünk, a mintákat a korong-lemez módszerrel analizáljuk (lásd előbb). A reakcióidő 5 óra. Az analitikai mérés eredményeit a 8. táblázatban adjuk meg. Vili táblázat Sejtek szárazsúlya (mg/ml) Specifikus aktivitás Teljes aktivitás 22. óra 0,73 <4,6 3,4 45. óra 1,79 5,0 9,0 69. óra 4,23 4,8 20 93. óra 5,72 4,7 27 J3. példa A kísérlet során az úgynevezett Spizízen-sóoldatot használjuk táptalajként. Ennek összetétele a következő : dikálium-hidrogén-foszfát 14 g kálium-dihidrogén-foszfát 6 g nátrium-citrát 1 g diammónium-szulfát 2 g magnézium-szulfát 7 H20 0Ő }- g kalcium-karbonát 2 g glükóz 10 g sóoldat 1 ml viz 1000 ml-re kiegészítve. A sóoldat összetétele a következő: vas-szulfát • 7 H20 100 mg mangán-klorid • 4 H20 100 mg cink-szulfát • 7 H20 100 mg víz 1000 ml-re kiegészítve. A táptalajt lombikokban osztjuk el és sterilizáljuk, majd előre sterilezett (szűrővel) glükózt adunk hozzá. A táptalajokat vegetatív tenyészettel oltjuk be, és 30 °C hőmérsékleten 48 órán át rázóasztalon tenyésztjük. Az előzőekben megadott módon analizáljuk a mintákat (korong-lemez-módszer), a reakcióidő 5 óra. A fermentlében lévő sejtek szárazsúlya 3,26 mg/ml, a specifikus aktivitás 6,8 x 10“10 mól hidrolizált észter/mg szárazsejt x perc. Ez ekvivalens 2,2 x 10'6 mól hidrolizált észter/liter fermentlé x perc aktivitássál. 14. példa A 12. példában megadottakat ismételjük meg, azzal a különbséggel, hogy a táptalajba nem 10 g/liter, hanem 15 g/liter glükózt adagolunk. A tenyészet pH-ját 0,5 normál ammónium-hidroxid és 0,5 normál nátrium-hidroxid-oldat 1 : 1 arányú elegyével szabályozzuk. Ily módon csökkentjük az adagolt ammónium-ionok mennyiségét. A fermentlevet nem vegetatív tenyészettel oltjuk, hanem a S. capillispira ferdeagarról nyert spóraszuszpenziójával. Más tekintetben a fermentációt a 12. példában megadottak szerint végezzük, 71 órán át. A fermentáció végén mintát veszünk, és korong-lemezmódszerrel analizáljuk. A minta ml-enként 4 mg szárazsejtet tartalmaz, a specifikus aktivitás 6,54 x lő-10 mól hidrolizált észter/perc x mg szárazsejt. Ez ekvivalens 2,6 x 10~6 mól hidrolizált észter/perc x üter fermentlé aktivitással. 15. példa 10 literes fermentációt végzünk az alábbi összetételű táptalajon: ammónium-klorid 0,1 g magnézium-szulfát • 7 H20 0,5 g dikálium-hidrogén-foszfát 2 g kalcium-klorid • 2 H20 0,2 g cink-szulfát ■ 7 H20 0,16 g 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 14
