188684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponenesének valanint a vele egyszerre keletkező A1 és A2 komponensek előállítására
1 188 684 2 tettünk cl. Az oszlopot először ugyanezt az acetonitril: víz elegye! használva mossuk, majd 70 20 ml-cs frakciót gyűjtünk, majd acetonitril:0,l n sósav 1:1 térfogatarányú elegyét alkalmazva, további 290 20 ml-es frakciót gyűjtünk. 5 Az oszlop eluálását vékonyréteg-kromatográfiával követjük 60 ^254 szilikagél lemezeken, valamint a frakciókat vizsgáljuk Sarcina lutea ellen. A 130 -265. frakciókat egyesítjük és az oldószert csökkentett nyomáson eltávolítjuk n-butanol hozzáadása közben, és így 20 miig n-butanolos sűrítményt kapunk. Ezt a térfogatú maradékot nagymennyiségű etil-éterbe öntjük, és a keletkezett csapadékot szűréssel eltávolítjuk, majd vákuumban, szobahőmérsékleten, foszfor-pentoxid felett szárítva, 1,015 g A/16686 jelű antibiotikum komplexet kapunk. 15 A fenti anyagból 0,67 g-ot 24 ml vízben és 76 ml metanolban oldunk. A kapott oldatot 3,0 x 62,0 cm-es oszlopra töltjük, mely 220 g Sephadcx LH—20-at tartalmaz, me tanok víz 7:3 térfogat elegyében. Az oszlopot ugyanezzel az elcggyel mossuk, 10 ml-cs frakciókat20 gyűjtve. Az A/16686 jelű antibiotikum komplexet tartalmazó frakciókat egyesítjük, majd az oldószert csökkentett nyomáson mindig kisebb, mint 35 °C hőmérsékleten, n-butanol hozzáadásával eltávolítjuk, és így kapunk körülbelül 10 ml butanolos maradékot. Ezt az 0I-25 datot etil-éterhez adjuk, és így kicsapjuk a tiszta A/16686 jelű antibiotikum komplexet. A csapadékot szűréssel elválasztjuk, etil-éterrel mossuk, majd csökkentett nyomáson, szobahőmérsékleten, foszfor-pentoxid felett szárítva 0,26 g tiszta A/16686 jelű antibio-30 tikum komplexet kapunk. Az így kapott A/16686 jelű antibiotikum komplex fehér, kristályos anyag, enyhén higroszkópos, 224— 226 °C hőmérsékleten olvad. Nagyon jól oldódik vízben és dimetil-formamidban, oldódik metanolban, eta-35 nolban, propanolbun és butanolban; de nem oldódik etil-éterben, petroléterben és benzolban. Az előzetesen ■ 140 °C hőmérsékleten, inert atmoszférában szárított A/16686 jelű antibiotikum komplex elemanalízise a következő, közelítő %-os összetételt mutatja (néhány ana-40 lízis átlaga): szén: 51,73 %; hidrogén: 6,34 %; nitrogén: 9,96 %; maradék: 1,00 %. 45 Klór-analízis a következő eredményeket adja: klór (össz-klórtartalom) 5,48%; klorid-ion 4,74%. A nujolban felvett infravörös elnyelési spektrum a következő elnyelési maximumokat mutatja (cnf1- ben): 3290, 3070, 2930 és 2860 (mijol), 1765, 1630,50 1510, 1455, 1375 (nujol), 1230, 1175, 1130, 1065, 1030, 1015,980, 840 és 820. A 3. példában leírtak szerint előállított A/16686. jelű antibiotikum komplex ultraibolya abszorpciós spektrumában a következő elnyelési maximumokat55 találjuk: a) metanolban: 232nm(E1 31%n *178) 60 265 nm (E11'|u = 107) 270 nm (K\%n = 96) c) 0,1 n nátrium-hidroxidot tartalmazó metanolban: 250 nm (E1,^ = 232) 295 nm (váll.) d) pH = 7,38 puffert tartalmazó metanolban: 231 nm (Ej®^ 167) 2:70 nm (EI1%m =96). Specifikus forgatási értéke [a]^4 +49,7° (c = 0,43% dimetil-formamidban). Különböző papír-kromatográfiás rendszerekben az A/16686 jelű antibiotikum komplex Rj-érrékei, detektálásra S. aureus ATCC 6538 jelű organizmust használva, a következő, XII. táblázatban találhatók: XII. Táblázat Az A/16686 jelii antibiotikum komplex kromatográfiás tulajdonságai (Whatman L sz. papír)+ Eluáló rendszer Rf-érték 1. pH = 6,0 Sörcnsen puffernd iclített n-butanol 0,00 2. 2%-os p-toluol-szulfonsavat tartalmazó, ■ízzel telített n-butanol 0,00 3. 2%-os animónium-hidroxidot tartalmazó, ’/ízzel telített n-butanol 0,00 4. pH = 6,0 Sorensen puffer, n-butanollal telítve 0,05 5. n-butanol:metanol:víz 4:1:2 arányú elegye 0,43 6. vízzel telített etil-acetát 0,00 7. 1 -b u t a n ol :c ce ( s a v : víz 2:1:1 arányú elegye 0,52 8. n-butanol:piridin:víz 4:3:7 arányú elegye 0,87 + = leszálló kromatográfia. Rm = 40 cm Mennyiségek: 20 pg anyag, oldva Vizes metanolban (2 mg/ml). Az A/16686 jelű antibiotikum komplex Rf-értékei különböző vékonyréteg-kromatográfiás rendszerben a következő, XIII. táblázatban találhatók (a körülményeket a táblázat alatt mutatjuk be): XIII. Táblázat Eluáló rendszerek (v/v/v) Rf-értékek 1. n-propanol:n-butanol:l n ammónium-hidroxid 2:3:4 arányú elegye (felső fázis) 2. n-butanol:ecetsav:víz 4:2:5 arányú elegye 3. n-butanol:etanol:0,l n sósav b) 0,1 n sósavat tartalmazó metanolban: 231 nm (EVL= 167) 0,15 0,61 0,61 y
