188684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponenesének valanint a vele egyszerre keletkező A1 és A2 komponensek előállítására
1 188 684 2 XI. Táblázat ED50 mg/nil nap s.c. S. pyogenes S. pneumoniae C 203skf 13400 Felton UC 41 A/16686 Ai komponens 0,041 (0,012-0,064) 0,15(0,17—0,14) A/16686 A2 komponens 0,048(0,026-0,070 0,18(0,20-0,16) A/16686 A3 komponens 0,14(0,096-0,21) 0,41 (0,46-0,36) Az A/16686 jelű antibiotikumok gátolják azoknak a mikroorganizmusoknak a növekedését is, melyek a fog körüli betegségek kifejlődéséhez járulnak hozzá. Az A/16686 jelű antibiotikumoknak ezt a fontos tulajdonságát egy mesterséges Streptococcus mutans ATCC 25175 folt-rendszer alkalmazásával vizsgálták. Ezekben a kísérletekben az A/16686 jelű hatóanyagok nagyon alacsony koncentráció-szinteken gátolták foltok képződését. A/. A/16686 jelű hatóanyagok tehát használhatók azoknak a betegségeknek a kezelésére, melyeket a rájuk érzékeny mikroorganizmusok okoznak. Például a Streptococciisos vagy Staphylococcusos fertőzések kezelésében, vagy a fogaknak fogszuvasodás következtében bellépő fogzománc és foganyag feloldódás és szétesés kezelésében és megelőzésében. Ezekben a kezelésekben az A/16686 jelű hatóanyagokat szabad bázis formában, vagy a megfelelő nem-toxikus, fiziológiailag elfogadható savaddíciós sók formájában használhatjuk. Sőt; ezek alkalmazhatok, mint egyedüli faktorok, vagy figyelembe véve aktivitási spektrumuk hasonlóságát — keverékek formájában, két vagy mindhárom faktor keveréke bármilyen arányban. Hogy' a találmány szerinti eljárást részletesebben illusztráljuk, a következő példákat adjuk meg. 1. példa Az Actinoplanes ATCC 33076 törzs tenyészetét előtenyésztjük, a törzset rázott lombikban növesztve, 100 ml vizes táptalajon, melynek a következő az összetétele: (g/l-beii) luískivonat 3 g/1 élesztőkivonat 5 g/1 ' tripton 5 g/1 oldiiató keményítő 24 g/1 glükóz . 1 g/1 kalcium-karbonát 4 g/1-A lombikokat körülbelül 96 órán át, 28-30 °C hőmérsékleten rázutjuk, majd a fermentlévet üvegfermentorba öntjük, mely 4 litert tartalmaz ugyanebből a táptalajból, majd 48 órán át ugyanezen a hőmérsékleten tenyész tjük. Ebből az elő tenyészetből használunk 3 litert egy nagyobb üvegfermentor beoltására, mely a fentiekben említett táptalajból 30 litert tartalmaz, majd 24 órán át 28 °C hőmérsékleten, levegőztetés közben elő tenyésztjük. Végül ebből az oltóanyagból 20 litert 8 használunk tankfermentor beoltására, mely a következő összetételű, 200 liter vizes táptalajt tartalmazza: h úskivon at 4 g/1 pepton 4 g/T élesztőkivonat 1 g/1 nátrium-klorid 2,5 g/1 szójaliszt 10 g/1 glükóz 25 g/1 kalcium-karbonát 5 g/1. A fermentort ezután levegőztetés közben kevertetve 28—30 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Időközönként az antibiotikus aktivitást mikrobiológiailag, agar-diffúziós módszerrel, teszt-organizmusként Sarcina lutea ATCC 9341 mikroorganizmust alkalmazunk. A maximális aktivitást a fermentáció 72—120. órájában érjük el. 2. példa Az összes fennen tlevet (170 litert), melyet az 1. példa szerint állítunk elő, 10 °C-ra hűtjük, majd pH-ját 3,5-re állítjuk, 18%-os sósavval. A kapott savas fermentlevet szűrési segédanyaggal (Clarccl Flow-Ma) leszűrjük, és a kiszűrt miccliumot vízzel mossuk. 30 liier metanolt használunk a micélium-lömeg extrahálására, majd szűrés után a miccliumot ismét extraháljuk, metanol-víz cleggyel (30 liter metanol — 5 liter váz). A kiextrahált micéliumot kidobjuk, majd a két metanolos extraktumot csökkentett nyomáson bepároljuk, alacsonyabb, mint 40 °C hőmérsékleten, és így 6 liter vizes konceiitrátuinot nyerünk. Ezt a vizes koncentrátumot háromszor 10 liter n-butanollal extraháljuk, majd az extruktumokat egyesítjük és csökkentett nyomáson kis térfogatra sűrítjük. Ezt a sűrítményt petroiéterhez adjuk, majd a kapott csapadékot dekantálássai elválasztjuk cs további petroléterhez adjuk. A csapadékot szűréssel eltávolítjuk, majd szobahőmérsékleten, csökkentett nyomáson szárítva 80 g nyers A/16686 •jelű antibiotikum komplexet kapunk, melynek MÍC-crtéke S. pneumoniae UC ellen 41,0,1 /Jg/ml koncentrációban. 3. példa A 2. példa szerint előállítóit 47,7 g nyers A/16686 jelű antibiotikum komplexet 1,4 liter klorofornuctanol: víz cleggyel (4:7:2 arányú) kezelünk, majd az olajos termeket dekantálássai elválasztjuk az, oldattól. A fenti elegyítő! további 70 ml-t adunk az. olajos termékhez, és az elválasztási megismételjük. 440.ml víz hozzáadásával az olajos termék megszilárdul, cs centrifugálással vagy szűréssel elválasztható. A szilárd anyagot elválasztás után vízben szuszpendáljuk (170.ml), 400 ml metanol hozzáadásával feloldjuk,majd leszűrjük. 1 n sósav hozzáadásával a vizei meCnolöS oldat pll-ját 3,5-re állítjuk, majd az oldószert eltávolítjuk csökkentett nyomáson, n-butanol hozzáadásával, alacsonyabb, mint 35 °C-cn, és így körülbelül 50 ml butauolos sűrítményt kapunk. 500 ml dietil-éter hozzáadásával csapadék keletkezik, melyet szűréssel elválasztunk, majd csökkentett nyomáson, szobahőmérsékleten szárítva 1,012 g, meglehetősen tiszta A/16686 jelű antibiotikum komplexet kapunk, MIC-ói teke 8. pyogcnes-rc 0,025 pg/inl. Az előzőekben leírtak alapján kapott 1,58 g A/16686 jelű antibiotikum komplexet feloldunk 100 ml 1:1 térfogatarányú acctonitrílnríz elegy ben, majd a kapott oldatot 430 g s/ilikagél 60 (Merck 0,06-0,2 mm) tartalmú oszlopra töltjük, melyet ugyanebben az.elegyben készí-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
