188684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponenesének valanint a vele egyszerre keletkező A1 és A2 komponensek előállítására
1 188 684 VIII. Táblázat Az A/16686jelű antibiotikum A 3 komponensének kromatograp.ás tulajdonságai (1, sz. Whatman papír)* Eluáló rendszerek Rf-érték 1. pH = 6,0 Sörensen-pufferral telített n-butano! 0,00 2. 2%-os p-toluol-szulfonsavat tartalmazó, vízzel telített n-butanol 0,00 3. n-butanol 2%-os ammóniuin-hidroxidot tartalmazó, vízzel telítve 0,00 4. n-butanollal telített, pH = 6,0 Sörensen-puffer 0,05 5. n-butano!:metanol:víz: 4:1:2 arányú elegye 0,48 6. vízzel telített etil-acetát 0,00 7. n-butanol:ecetsav:víz: 2:1:1 arányú elegye 0,44 leszálló kromatográfia Rm: 40 cm. Mennyiségek: 50 jug hatóanyag oldva víz:acctonitril: 1:1 térfogatarányú elegyében (2 ing/ml). Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponensének különböző vékonyréteg-kromatográfiás rendszerben talált Rf-értékcit a következő táblázatban (IX.) foglaljuk össze (a körülmények a táblázat után láthatók): IX. Táblázat Eluáló rendszer Rf-érték 1 2 3 4 5 1. vizes, 2,5%-os ammónium-formiát: acetonitril (65:35)x 0,32 2. n-butanol:ecetsav:víz 4:2:5 arányú elegye 0,80 3. n-butano!:ecetsav: víz 4:2:5 arányú elegye 0,52 4. n-propanolai-butanokl n ammónium-hidroxid 2:3:4 arányú elegye (felső fázis) 0,12 5. u-butanol:ecetsav:víz 4:1:5 arányú elegye 0,15 Rm: körülbelül 140 mm. Mennyiségek: 2-5 jul oldat (1 mg/ml) 1:1 arányú acetonitril: víz elegy ben: Előhívás: a) jódgőz, b) 254 nm hullámhosszúságú ultraibolya fény. 1,2-szilanizált szilikagél 60 F2S4 lemezek (Merck): előhívás: a, b; 3,4, 5-szilikagél 60 ^254 lemezek (Merck): előhívás: a. (x - belső standardok: koffein Rf 0,60; kortizon Rf 0,35; dexametazon Rf0,30) Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponensének amiiosav analízise 6 n sósavval, 110 °C hőmérsékleten, 6 órán át végzett savas hidrolízise után legalább a következő aminosavak jelenlétét mutatta ki: alanin, leucin, glicin, aszparaginsav, fenil-alanin, ornitin, p-hidroxi-fenil-glicin, és hidroxi, klór-szubsztituált fenil-glicin. Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponensének 2 n kénsavval 2 órán át 100 °C hőmérsékleten végzett savas hidrolízise után kapott hidrolizátum analízise a semleges szénhidrát D-mannúz jelenlétét mutatja. Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponensének nagynyomású folyadék-kromatográfiás analízise a következő körülmények között: /i-Bomlapack^C ,8 oszlop (3,ö mm belső átmérő, x 300 mm) és mozgó fázisként 2 ml/perc áramlási sebességgel 0,025 mól ammóniumfonniátot és acetonitrilt 60/40 térfogatarányban használva, a tß értékre 6/84 másodpercet adott. (Belső standardok: antracén tg 35 perc 18/100 másodperc; o-nitro -naftalin t^ 11 perc 14/100 másodperc; toluol ír 8 perc 64/100 másodperc.) Az. A/16686 jelű antibiotikum A2 komponense, valamint az A, és A3 komponensek antimikrobiális hatású anyagok, és különösen aktivak Gram-pozitív mikroorganizmusok ellen. Részletesen, az A/16686 jelű antibiotikumok in vitro aktivitási spektrumát a következő, X. táblázatban foglaljuk össze: X. Táblázat Organizmusok MIC (pg/ml) 2 A, komponens A2 komponens a3 komponens S. aureus ATCC 6538 0,1 0,1 1,6 S. aureus Tour (oltóanyag lO^/rnl) 0,2 0,2 1,6 S. aureus Tour (oltóanyag 106/ml) 0,4 0,8 3,1 S. aureus Tour (+30% szarvasmarha szérum) 0,4 0,8 1,6 S. pyogenes C 203 SKF 13400 0,012 0,0)2 0,012 S pneumoniae Felton UC 41 0,025 0,025 0,025 S foecium ATCC 10541 0,1 0,05 0,1 E. coli SKF 12140 >100 >100 >100 Az. A/16686 jelű antibiotikumokról kimutatták, hogy igen kiváló in vivo aktivitást mutatnak különböző kórokozó organizmusokkal szemben. Az A/16686 jelű antibiotikumok hatásossága rögtön nyilvánvaló lesz a XI. táblázatból, mely két különböző mikroorganizmussal szemben egérben mutatja az EDi0 értékeket. 5 10 15 20 25 30 '35 40 45 50 55 60 65 7
