188684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponenesének valanint a vele egyszerre keletkező A1 és A2 komponensek előállítására
1 188 684 2 VI. Táblázat A z A/166S6 jelű antibiotikum A, komponensének kromatográfiás tulajdonságai (l.sz. Whatman papír f Eluáló rendszer Rf-érték 1. pH = 6,0 Sörcnsen-pufferrcl telített n-butanol 0,00 2. 2% p-toluol-szulfonsavat tartalmazó, vízzel telített n-butanol 0,00 3. 2% ammőnium-hidroxidot tartalmazó, vízzel telített n-butanol 0,00 4. pH = 6,0 Sörensen-puffer, n-butanollal telítve 0,05 5. n-butanl:mctanol:víz eluáló elegy 4:1:2 összetételben 0,48 6. vízzel telített éti I-a ce tát 0,00 7. n-butauo!:ecetsav:víz eluáló elegy 2:1:1 arányban 0,44 + = leszálló kroroatográfia Rm = 40 cm Mennyiségek: a hatóanyag 50 pg-ja oldva víz:acetonitril 1:1 térfogatarányú elegyében (2 mg/ml). Az A/16686 jelű antibiotikum At komponensének különböző vékonyréteg-kromatográfiás rendszerekben mutatott Rf-értékcit a következő, VII. táblázatban foglaltuk össze (a körülményeket a táblázat után közöljük): VII. Táblázat Eluáló rendszer ( v/v/r) Rf-érték 1. vizes 2,5%-os ammónium-formiát:aceto- ‘ nitril 65:35 arányban* 0,40 2. n-butánol:ecetsav:víz elegy 4:2:5 arányban 0,80 3. n-butanoI:ccetsav:víz elegy 4:2:5 arányban 0,52 4. n-propanol:n-butanol:l n ammónium-hídroxid-elegy 2:3:4 arányban (felső fázis) _ 0,12 5. n-butanol:ecetsav:víz elegy 4:1:5 arányban 0,15 Rm: körülbelül 140 mm. Mennyiségek: 2—5 p\ oldat (1 mg/ml) acetoriitriEví/. 1:1 térfogatarányú elegy'ében. Előhívás: a) jódgnz; b) 254 nm (uillámhosszúságtí ultraibolya fény. 1,2-sziianizált szílikagél 60 F254 lemezek (Merek): előhívás a, b; 3, 4, 5 — szilikagél 60 Fi54 Merck: előhívás: a), (x = belső standardok: koffein Rf 0,60; kortizon Rf 0,35; dexametazon Rf 0,30). Az A/16686 jelű antibiotikum Aj komponensének aminosav-anaiízisc 6 n sósavval, 110 °C hőmérsékleten, 6 órán át tartó savas hidrolízise után legalább a következő aminosavak jelenlétét mutatja: alanin, leucin, glicin, aszparaginsav, fcnil-alanin, omitin, p-hidroxi-fenil-glicin, valamint hidroxi-klór-szubsztituált-fenil-gllcin. 6 Az A/16686 jelű antibiotikum Ai komponensének 2 órán át 2 n kénsavban, 100 °C hőmérsékleten való savas hidrolízise után kapott savas hidrolizátum analízise a D-mannóz semleges szénhidrát jelenlétét mutatja. Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponensének nagynyomású folyadék-kromatográfiás analízise során a következő körülmények között p-fiondapack^C| 8 oszlop (3,9 mm belső átmérő, x 300 mm), valamint 0,025 mól ammónium-formiát/acetonitril 60/40 térfogatarányú elegyét, mint mozgó fázist 2 ml/perc áramlási sebességgel alkalmazva a t^ érték 3 perc 84/100 másodperc (belső standardok: antracén 35 perc 18/100 másodperc; a-nitro-naftalin ír 11 perc 14/100 másodperc; toluol 8 perc 64/100 másodperc). A/16686 jelű antibiotikum A 3 komponense Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponense fehér, amorf por, mely bomlás közben körülbelül 220 °C hőmérsékleten olvad. Nagyon jól oldódik vízben, dimetiiformamidban és vizes metanolban; oldódik metanolban és etanolban; de nem oldódik etil-éterben, pelroléterben és benzolban. Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponensének előzetesen 140 SC hőmérsékleten inert atmoszférában szárított mintájának elemanalízise a következő, közelítő %-os összetételt mutatja (átlag): szén: 48,41 %; hidrogén: 5,84 %; nitrogén: 9,09 %; maradék: 9,01 %. A klór-analízis a következő eredményeket adja: klór (ossz klórtartalom): 1,68%; klorid-ion: 1,16%. Az A/16686 antibiotikum infravörös abszorpciós spektruma nujolban a mellékletben közölt 6. ábrán látható. A következő abszorpciós maximumokat figyeltük meg: [3290, 2930 és 2860 (mijoi), 1765, 163S/l510, 1455 és 1375 (nujol), 1260, 1240, 1175, 1100, 1060, 1020, 975, 840 és 805 cnf1 ]. Az A/16686 antibiotikum A3 komponensének ultraibolya abszorpciós spektruma, mely a mellékletben található 7. ábrán látható, a következő abszorpciós maximumokat mutatja: a) semleges metanolban: 234 nm (F,1 '*m * 147) 267 nm (E1,^ = 74) b) 0,1 n sósavat tartalmazó metanolban: 232 nm ( F.1 ^ = j 32) 270 nm (E1,^ = 76) c) 0,1 n nátrium-hidroxidot tartalmazó metanolban: 250 nm (E,1 = 202) = 295 nm (váll). Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponensének specifikus forgatóképessége: [a]20: + 50 ±4° (c * 0,48, sósav 0,01 N). D Az A/16686 jelű antibiotikum A3 komponense különböző papír kromatográfiás^rendszerben a következő Rf cerckeket adja Bacillus subtilis ATCC 6633 számú baktériumot használva kimutató organizmusnak, melyet a következő, VHÎ. táblázatban mutatunk be: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
