188684. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponenesének valanint a vele egyszerre keletkező A1 és A2 komponensek előállítására
188 684 1 IV. Táblázat (folytatás) Rf-érték 2% ammónium-hidroxidot tartalmazó vízzel telített n-butanol 0,00 pH =6,0 Sorensen puffer, n-butauollal telítve 0,05 n-butanóI:ínetanol:víz:4:l :2 0,48 vízzel telített etil-acctát 0,00 n-butanol:ecetsav:víz: 2:1:1 -0,44 * - leszálló kromatográfia Rm: 40 cm mennyiségek: a hatóanyag 50 jug-ja, oldva H2 0:acetonitril 1:1 (v/v)-ben (2 mg/ml). Az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponensének különböző vékonyréteg-kromatográfiás rendszerekben kapott Rf-értékét a következő, V. táblázatban közöljük (a körülményeket a táblázat alatt jelezzük): V. Táblázat EAuáló rendszer Rj -érték (v/v/v) 1. vizes, 2,5%-os ammonium-formíát :acetonitril (65:35)x 0,36 2. n-butaüol:ecetsav:víz 4:2:5 0,80 3. n-butanol:ecetsav:víz 4:2:5 0,52 4. n-propanol:n-butanol:1 n ammónium--hidroxid 2:3:4 (felső fázis) 0,12 5. n-butanol:ecctsav:víz 4:1:5 0,15 Rm: körülbelül 140 mm. Mennyiségek: 2—5 pl az. oldatból (1 mg/ml) acetonitril : víz. 1:1 elegyében. Előhívás: a) jódgőz, b) 254 nm hullámhosszúságú ultraibolya fény. 1,2-szilanizált szilikagél 60 F2S4 lemezek (Merck): előhívás: a, b; 3,4,5 — szilikagél 60 F254 lemezek (Merck): előhívás: a. (x = belső standard: koffein Rf 0,6; kortizon Rf 0,35; dexametason Rf 0,30). Az A/16686 antibiotikum A2 komponense a következő jellemző reakciókat adja: ninhidrin (3% etilalkoholos oldat) pozitív Molish pozitív Biuret pozitív Miliőn negatív 1% vas(lll)-klórid—1% kálium-hexaciano-ferrát vizes oldat zöld szín kálium-pennanganát (savas) . pozitív koncentrált kénsav negatív Az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponensének aminosav-analízise 6 n sósavval 110 °C hőmérsékleten, 6 órán át végzett savas hidrolízis után legalább a következő aminosavak jelenlétét mutatta ki: alanin, leucin, gUcin, aszparaginsav, fenil-alanin, omitin, p-hidroxi-fenil-glicin, és hidroxi- és klór-szubsztRuált fenil-glicin. Az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponensének 2 órás, 2 n kénsavban 100 °C hőmérsékleten végzett savas hidrolízise után a hidrolizátumban a D-mannóz semleges szénhidrát jelenlétét mutatta ki. Az A/16686 jelű antibiotikum A2 komponensének nagynyomású folyadék-kromatográfiás analízise, melynek során p-BondapackRCiS oszlopot (3,9 mm belső átmérő, x 300 mm) és acetonitril 60/40 (térfogat%) keveréket használtunk mozgó fázisként 2 ml/perc áramlási sebességgel, azt mutatta, hogy a hatóanyag retencíós ideje (tjf) 4 perc 99/100 másodperc (belső standardok: antracén ír 35 perc 18/100 másodperc; a-nitro-naftalin Ír 11 perc 14/100 másodperc; toluol ír 8 perc 64/100 másodperc). A/l 6686 jelű antibiotikum A , komponense \z A/16686 antibiotikum Ai komponense fehér, amorf por, mely bomlás közben körülbelül 210—220 °C- on olvad. Nagyon jól oldódik vízben, dimetil-formamidbar, valamint vizes metanolban; oldódik metanolban és e tat ólban; de nem oldódik etil-éterben, pctroléterben és benzolban. Az A/16686 jelű antibiotikum Aj komponensének előzetesen 140 °C hőmérsékleten, inert atmoszférában szárított mintájának elemanalízise a következő, közelítő %-os összetételt mutatja (átlag): szén; 50,31 %; hidrogén: 6,00 %; nitrogén: 9,92 %; maradék: 6,07 %. Az A/16686 antibiotikum Aj komponensének klór. analízise a következő eredményeket adja: klór (ossz klór-tartalom) 1,61%; klorid-ion 0,90%. Az A/16686 jelű antibiotikum At komponensének 'infravörös abszorpciós spektruma nujólban felvéve a mellékletben közölt 4. ábrán látható. A következő abszorpciós maximumokat figyeltük meg: [3290, 2930 és 2860 (nujol), 1765, 1630, 1510, 1455 és 1375 (nujol), 1260, 1235, 1175, 1150, 1130, 1060, 1015, 975,840. és 810 cnf1.} Az A/16686 jelű antibiotikum Ai komponensének ultraibolya abszorpciós spektruma, melyet a mellékletben az 5. ábrán közlünk, a következő abszorpciós maximumokat mutatja: a) semleges metanolban: 233 nm (EI1%fctll=202) 266nm (E1,^ = 106) b) Ö, 1 n sósavat tartalmazó metanolban: 232 nm (E1,^ = 219) 270 nm (E1/^,, = 110) c) 0,1 n nátrium-hidroxidot tartalmazó metanolban: 251 nm (E\%m = 264) = 290 nm (váll). Az A/16686 jelű antibiotikum At komponensének specifikus forgatási képessége: [a]2 3 4 5f) = +57 +4° (c = 051, víz). Az a/16686 jelű antibiotikum A[- komponensének különböző papír-kromatográfiás rendszerben mutatott Rf-értékeit, Bacillus subtilis ATCC 6633 számú baktériumot használva kimutató organizmusnak, a következő táblázatban mutatjuk be: 2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
