188667. lajstromszámú szabadalom • Eljárás depolimerizált, szulfatált heparin-poliszacharid elegyek előállítására
188 667 1 g fenti módon kapott észter-benzetóniumsót 20 ml dimetil-formamidban oldunk,és 1 ml l,5-diaza-diciklo[4, 3,015-nonent adunk hozzá, majd az elegyet 5 óra hosszat 60 °C hőmérsékleten tartjuk. Lehűlés után 50 ml 10%-os metanolos nátrium-acetát-oldatot adunk hozzá, a képző- ^ dött csapadékot (0,346 g) szűréssel elkülönítjük, majd 5,8 ml n vizes nátrium-hidroxid-oldat hozzáadása után az eíegyet 2 óra hosszat 0 °C hőmérsékleten tartjuk. A vizes fázist ezután n vizes sósavoldat hozzáadása útján semlegesítjük, és az oldat nátrium-klorid-koncentrációját ^ nátrium-klorid hozzáadása útján 10%-ra állítjuk be. Kétszeres térfogatú metanol hozzáadása útján a kapott terméket leválasztjuk, szűréssel elkülönítjük,és metanollal mossuk; ily módon 0,253 g depolimerizált heparint kapunk nátriumsó alakjában. 15 18. példa 10 g heparin (nátriumsó) 40 ml vízzel készített oldatához 2,5 ml hangyasavat adunk, majd lassan, keverés közben 150 ml 10%-os vizes benzetónium-klorid-oldatot 2Q adunk az elegyhez. A képződött csapadékot centrifugálással elkülönítjük, vízzel mossuk,és vákuumban megszárítjuk. 20,5 g benzetóniumsav-heparinátot kapunk. 2,95 g fenti módon kapott terméket 60 ml dimetil-formamidban oldunk, és az oldathoz 5,9 ml n-propanol/ 25 /metanol eleggyel készített 0,1 n tetrabutil-ammónium-hidroxid-oldatot adunk. 2,95 g 4-klór-benzil-klorid hozzáadása után az elegyet szobahőmérsékleten 5 napig állni hagyjuk, majd 74 ml 10%-os metanolos nátrium-acetátoldatot adunk hozzá. A kapott csapadékot szűréssel el- 3Q különítjük és megszárítjuk; 1,32 g heparin-(4-klór-benzil)-észtert kapunk nátriumsó alakjában. A fenti módon kapott észtert 6,4 ml vízben oldjuk és lassan, keverés közben hozzáadunk 12,8 ml20%-os vizes bénzetónium-klorid-oldatot. A képződött csapadékot 3jcentrifugálással elkülönítjük, vízzel mossuk,és vákuumban megszárítjuk. Ily módon benzetóniumsó alakjában kapjuk a heparin-(4-klór-benzil)-észtert. Hozam: 20%.' 1 g fenti módon kapott észter-benzetóniumsót 20 ml diklór-metánban oldunk, és 1 ml 1,5-diaza-biciklo-[4,3,0]5-nonént adunk hozzá. Az oldatot 5 óra hosz-1 szat forraljuk visszafolyató hűtő alkalmazásával, majd az oldószert vákuumban elpárologtatjuk, a maradékot 15 ml dimetil-formamidban oldjuk,és 20 ml 10%-os metanol nátrium-acetát-oldatot adunk hozzá. A képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük,és metanollal mossuk. Az így kapott 0,405 g terméket 6 ml n vizes nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával 0 °C hőmérsékleten 2 óra hosszat állni, hagyjuk. A vizes fázist n vizes sósavoldat hozzáadása útján semlegesítjük,és a nátrium-kloridnak az oldatban való koncentrációját nátrium-klorid hozzáadása útján 10 %-ra állítjuk be. Az oldathoz kétszeres térfogatú metanolt adunk, majd a képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük,és metanollal mossuk. Ily módon 0,355 g depolimerizált heparint kapunk nátriumsó alakjában. 19. példa 0,600 g heparint (nátriumsó) 7 ml vízben oldunk,és az oldat pH-értékét n vizes sósavoldat hozzáadása útján 3,5-re állítjuk be. 0,300 g l-etil-3-(3-dimetilamino-propil)-karbodümidet adunk az elegyhez,és ennek oldódása utón az oldatot szobahőmérsékleten 1 óra hosszat állni hagyjuk. A reakcióelegyhez 2,5 ml 280 g/liter koncentrációjú vizes nátrium-klorid-oldatot adunk, majd 15 ml metanolt adunk az elegyhez. A képződött csapadékot szűréssel elkülönítjük, metanollal mossuk,és vákuumban megszárítjuk. Ily módon 0,527 g heparin-metilésztert kapunk nátriumsó alakjában; e termékben a karboxilcsoportok észterezettségi foka 50 %. Hozam: 50 %. 0,300 g fenti módon kapott észtert 7,5 ml 0,1 n vizes nátrium-hidroxid-oldatban oldunk, majd az oldatot 2 óra hosszat 60 °C hőmérsékleten tartjuk. Lehűlés után az oldatot 0,1 n vizes sósavoldat hozzáadása útján semlegesítjük, és a közeg nátrium-klorid-koncentrációját nátrium-klorid hozzáadása útján 10%-ra állítjuk be.Kétszeres térfogatú metanol hozzáadása útján a terméket leválasztjuk ,és szűréssel elkülönítjük. Ily módon 0,200 g depolimerizált heparint kapunk nátriumsó alakjában. Az 1—19. példa szerint előállított termékek (depolimerizált heparin nátriumsó alakjában) jellemző tulajdonságait az alábbi B) és C) táblázatban foglaltuk össze. 2 B) táblázat Példa száma Uronsavak,% S% N % r i20 [Q] D Átlagos molekulasúly (dalton) Molekulasúly-szórás 1. 23,0 11,5 2,1 +44° 7300 1600-12000 2. 26,0 11,6 2,0 +44° 6500 1800-13000 3. 25,4 12,0 2,2 +44° 6400 3000-11000 4. 23,9 10,9 2,1 +35° 5500 2200-13000 5. 22,8 12,2 2,2 +39° 5000 2000-13000 6. 24,5 10,8 2,3 +33° 4200 1000-10000 7. 25,2 1U 2,0 +33° 4100 1700-10000 8. 23,7 11,1 2,2 +35° 4500 1000-10000 9. 26,0 11,8 22 +38° 4000 2000-10000 10. 25,2 10,9 2,1 +41° 3800 1000-9000 11. 23,8 11,0 2,3 +27° 2900 1000-8000 12-23,9 11,5 2,0 +40° 4000 2000-9000 ' 3. 24,3 11,8 2,2 +45° 9000 3000-20000 i4. 25,6 12,0 2,1 +44° 8500 3000-20000 15. 25,3 11,8 2,3 +45° 4000 2000-20000 9
