188657. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antikoaguláns hatású mukopoliszacharidok előállítására
1 188 657 2 USP-titer: 17IU/mg YW-titcr: 240 IU/mg APTT')-titer 12 IU/mg 1) az „activated partial thromboplastin time” angol kifejezés rövidítése - az említett fogalom a Caen, J. és munkatársai által a „L’hémostase, expansion scientifique, 1976, 169—170” szakirodalmi helyen ismertetett kaolin-ccfalin idővel ekvivalens. Egy másik párhuzamos kísérletben a fentiekben ismertetett módon járunk el, azonban kiindulási anyagként egy másik sarzsból kapott heparint használunk. Ennek a heparinnak az YW/USP-titer-aránya közel 1 és USP-titere 165 IU/mg. A heparinból 3 g-ot feloldunk 150 ml desztillált vízben +4 °C-on, majd a kapott oldathoz 517 mg nátrium-nitritet adunk. A korábbiakban ismertetett módon végrehajtott kezelés eredményeképpen 2,8 g mennyiségben olyan terméket kapunk, amelynek USP-titere 24 IU/mg és YW/ titere 250 IU/mg, Egy további párhuzamos kísérletben a korábbiakban ismertetett körülmények között 50 g olyan heparinból indulunk ki, amelynek USP-titere 158 IU/mg és YW/USP titer-aránya 1 körüli. A heparint feloldjuk 2500 ml desztillált vízben, majd +4 °C-on 8,625 g nátrium-nitritet adunk a kapott oldathoz. A kezelés végén 46 g mennyiségben olyan termék különíthető el, amelynek a következő jellemzői vannak: USP-titer: 13 IU/mg YW/titer: 270 IU/mg APTT-titer: 7 IU/mg A (II) képletű végcsoport mennyisége 0,25 millimól 1 g termékre, a Smith és Gilkeron által az Annal. Biochem., 98. 478-480 (1979) irodalmi helyen ismertetett módszer szerint meghatározva. 2. példa Ebben a példában a heparin részleges.depolimerizálása útján kapott és (III) képletü 2,5-anhidro-D-mannit szerkezetű (az 1. példában említett módon) végcsoportokat tartalmazó mukopoliszacharid-láncok előállítását ismertetjük. Az 1. példában kapott termékből 47 g-ot feloldunk 1200 ml desztillált vízben szobahőmérsékleten, majd a kapott oldathoz intenzív keverés közben 7 g kálium-bórhibridet adunk, A keverést 2 órán át folytatjuk szobahőmérsékleten, ezt követően a reakcióelegyhez ecetsavat adagolunk olyan mennyiségben, hogy a pH értéke 4 alá csökkenjen. Ezáltal a reakcióba nem lépett kálium-bór-hibridet elbontjuk. Ezután a reakcióelegyet 30 percen át keverjük, majd a pH-t 7,5 értékre beállítjuk 5 n nátrium-hidroxid-oldat adagolása útján. Ezt követően a reakcióelegyhez térfogatára vonatkoztatva ötszörös mennyiségű alkoholt adagolunk. A kivált csapadékot elkülönítjük, levegőáramban szárítjuk, tiszta etanollal mossuk és vákuumban 60 °C-on szárítjuk. így 46,5 g mennyiségben olyan terméket kapunk, amelynek jellemzői a következők: USP-titer: 17 IU/mg YW/titer: 250 IU/mg APTT-titer: 11 IU/mg 3. példa Ebben a példában a heparin részleges depolimcrizálása útján kapott és (IV) képletű 2,6-anhidro-D-mannosav szerkezetű (az 1. példában említett módon) végcsoportokat tartalmazó mukopoliszacharid-láncok előállítását ismertetjük. Az 1. példában legutoljára ismertetett kísérletben kapott termékből 40 g-ot feloldunk 400 ml desztillált vízben szobahőmérsékleten, majd a kapott oldat pH-ját 8,5 értékre beállítjuk 5 n nátrium-hidroxid-oldattal. Ezután az oldathoz hozzáadjuk a 2 g kálium-permanganát 40 ml vízzel készült oldatát. A reakcióelegyet 15 órán át intenzív keverésnek vetjük alá, a keverés közben a pH-t állandóan 8,5 értéken tartva megfelelő mennyiségű 5 n nátrium-hidroxid-oldat adagolása útján. 15 óra elteltével a reakcióba nem lépett kálium-permanganát eltávolítása céljából 0,2 térfogatrésznyi (90 ml) etanolt adagolunk. A reakcióelegyet ezután 1 órán át állni hagyjuk, majd a kicsapódott mangán-dioxidot centrifugálással eltávolítjuk. Ezt követően etanollal reakcióterméket kicsapjuk, majd mossuk és szárítjuk. így 35 g terméket kapunk a következő jellemzőkkel: USP-titer: 12 IU/mg YW-üter: 270 IU/mg APTT-titer: 8 IU/mg 4. példa Ebben a példában azt mutatjuk be, hogy hogyan alakítható át egy, (II) képletű végcsoportot tartalmazó mukopoliszacharid-lánc Rí helyén -CH2NHCH2CH2OH csoportot tartalmazó (I) képletű végcsoportot hordozó mukopoliszacharid-lánccá. Az 1. példában ismertetett módon előállított termékből 1 g 10 ml nátrium-foszfát-pufferrel készült oldatához 0,15 ml (2,5 millimól) etanol-amint és 160 mg (2,5 millimól) nátrium-ciano-bór-hibridet adunk, majd az így kapott reakcióelegyet 37 °C-on 14 órán át állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet megsavanyítjuk, majd Sephadex G-15 márkanevű gélből (a Pharmacia Fine Chemicals uppsalai svéd cég terméke) készült, 100*1,6 cm méretű oszlopon kromatografáljuk, eluálószerként vizet használva. A pozitív értékű fajlagos forgatóképességet mutató frakciókat összeöntjük, majd liofilizáljuk, kvantitatív hozammal az első bekezdésben definiált terméket kanva. A termékjellemzői a következők: USP-titer: 13 IU/mg YW-titer: . 240 IU/mg Tekintettel gyógyászati felhasználásukra a találmány szerinti eljárással előállított termékeket előnyösen további tisztításnak vetjük alá ismert módszerekkel, például kromatografálással, alkoholos kicsapással vagy dialízissel. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek farmakológiai vizsgálata alapján megállapítható, hogy egyértelműen szelektívebb hatásúak az Xa faktor gátlásának vonatkozásában, mint az összehasönlításképpen vizsgált heparin. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek további döntő előnye, hogy nem okoznak olyan személyek vérében vérlemezke-aggregálódást, amelyek esetén a heparin ilyen hatású. A találmány szerinti eljárással előállított termékeket különböző rendszerekben vizsgáljuk. 1. A vérlemezkékre kifejtett hatásukat in vitro em-5 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
