188655. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pektiniliáztartalmő enzimkomlex előállítására
1 188 655 2 koncentrációban. A pH-t 5,0-re állítjuk. A tápközeget sterilezés után beoltjuk 1 liter 24 órás Aspergillus niger OKI 00202 tenyészettel. A tenyészetet 400 ford, min"1 sebességgel keverjük. A 36 órás tenyészetben megkezdjük a hígítást 2% szárazanyag-tartalmú répakivonat tápközeggel (összetétel 2% szárazanyag-tartalmú rénaszeletkivonat, amelybe literenként 5 g (NH4)2S04-ot, 5 g KH2P04-ot, 0,5 g MgS04-ot, 50 ml 2% szárazanyagtartalmú korpakivonatot, valamint elemnyomokat (Co**, Mn**, Zn^’ Fe++, 0,001-0,001 g koncentrációban adagolunk). A hígítási sebesség 0,036 h"1. Az állandósult állapot beállása után a tenyészet micélium-koncentrációja 4,99 g l"1, specifikus PL-aktivitása pedig 1,18 /miól min-1 ml-1. 10. példa A 9. példában leírt tápközeget, azonos módon és időpontban azonos tenyészettel oltjuk be. A keverési sebesség 800 ford, min-1. A levegőztetés intenzitása valamint a higítási sebesség (0,036 h"1 ) szintén megegyezik a 9. példában leírtakkal, csupán a hígító tápközeg (répakivonat) szárazanyag-tartalma 3%, amely literenként 5 g (NH4)2S04 -ot, 10 g KH2P04-ot, 0,5 g MgS04-ot, 50 ml 2% szárazanyag-tartalmú korpakivonatot, valamint elemnyomokat (Co++, MnH, Zn** és Fe** sókat) tartalmaz 0,001—0,001 g koncentrációban. Az állandósult állapot elérése után a tenyészet micélium-koncentrációja 5,71 g l"1 PL-aktivitása 1,81 /am ól min-1 mr1, PE- aktivitása pedig 1,5 mval min-1 raF1. 11. példa 9,5 liter 4% szárazanyag-tartalmú répaszelet kivonatba bemérünk 70 g (NH4)2S04-ot, 50 g KH2P04-ot, 5 g MgS04 -ot, 500 ml 3% szárazanyag-tartalmú korpakivonatot és elemnyomokat (Co*4, Mn**, Zn++ és Fe** sókat) 0,001-0,001 g koncentrációban. A pH-értékét 5,0-re állítjuk. A táptalajt sterilezés után 1 liter 24 órás Aspergillus niger OKI 00202 tenyészettel oltjuk be. A tenyészetet percenként 10 liter levegő átáramoltatásával levegőztetjük és 800 ford, min-1 sebességgel keverjük. A hígító tápközeg 2% szárazanyag-tartalmú répaszelet-kivonat, amely literenként 50 ml 3% szárazanyag-tartalmú korpakivonatot, 5 g (NH4)2S04-ot, 5 gKH2P04- ot, 0,5 g MgS04-ot és elemnyomokat (Co++, Mn++, Zn++ és Fe++ sókat) tartalmaz. A pH-értéke 4,5. A kis hígítási sebességek (0,03—0,06 h _1) a PL-képződésnek, a nagyobb (0,08—1 h"1) hígítási sebességek a PE-képződésnek kedveznek. A szakaszos tenyészet hígítását a 48 órás tenyészetben kezdjük meg. Az átmeneti állapot 90— 100 h tenyészetben fejeződik be. Az állandósult állapot általában 5—7 térfogatcsere után elfogadhatóan stabil. Az állandósult állapotban mért koncentrációk: hozamok: 0,036 h/1 hígítási sebességnél: Micé-lium 11,3 g l“1 3,7 g h"1 PL 2,22 pmól min”1 ml“1 1465,0 gmól min-1 PE 1,56 mval min-1 ml“1 1029,0 mval min"1 0,06 h~l higítási sebességnél: 'Micé~ lium 10,90 g l"1 7,2 g h"1 PL l,90jumól min”1 mr1 1254,0/rmól min"1 PE 1,73 mval min"1 ml"1 1142,0 mval min"1 4 0. 08 Tf1 hígítási sebességnél: Micélium 10,80 g!"1 9,5 g h"1 PL 1,34 jumól min"1 ml"1 884,0 jumól min"1 PE 1,93 mval min-1 mr1 • 1274,0 mval min"1 12. példa A fenti összetételű hígító tápközeg pH-értékének 5,0-re állításával és 0,06 h-1 hígítási sebesség alkalmazásával a tenyész-szűrlet specifikus PL-aktivitása növelhető, specifikus PE-aktivitása pedig csökkenthető. Koncentrációk: hozamók: Micélium 11,0 gl"1 7,3 g h"1 PL 2,23 jumól min"1 ml"1 1472,0jumól min"1 PE 1,29 mval min"1 ml"1 851,0 mval min"1 13. példa A folytonos fermentáció összegyűjtött fermentlevének specifikus pektinliáz-aktivitása 2,42 jumól min"1 ml"1, PE-aktivitása pedig 1,96 mval min"1 mT1. A filmbepárló készülékben (40 °C, 76 1 h“1) átfolyási sebességgel) végzett bepárlás után a sűrítmény specifikus PL-aktivitása 7,5 jumól min"1 ml"1 (kitermelés 86%), PE-aktivitása pedig 3,86 mval min"1 ml"1 (kitermelés 54%). A keverési sebesség 300 ford, min"1, a levegő átáramol tatás pedig 80 liter percenként. Leálláskor a micéliumhozam 7,5 g l"1, a fermentlé specifikus PL-aktivitása 1,909 jumól min"1 ml"1, PE- aktivitása pedig 1,204 mval min"1 mT1. . A fermentlé folyamatos működésű filmbepárló készülékkel végzett besűrítése (32—40 °C, 75 1 h"1 átfolyási sebességgel, 3-szori visszatáplálással) után a sűrítmény PL-aktivitása 10,330 jumól min"1 mÉ1, kitermelése pedig 84%. A sűrítmény specifikus PE-aktivitása 5,24 mval min”1 mr1, kitermelése pedig 68%. 14. példa Az enzimkomplex elválasztása és tisztítása önmagában ismert módszerekkel történhet. Az alábbiakban néhány lehetséges eljárást hasonlítunk össze: 1. A fermentlé besűrítése filmbepárló készülékkel PL összaktivitás PE összaktivitás 301 fermentlé 54600 jumól min"1 60900 mval min"1 121 sűrítmény 51000 jumól min”1 28790 mval min"1 Kitermelés 93% 47% 2. 101 fermentlé 35 1 etanollal kicsapva: kitermelés 110 g enzimkészítmény PL összaktivitás PE összaktivitás 101 fermentlé 15 200 jumól min"1 2030Q mval min"1 110 g enzimkészítmény 9663 jumól min"1 5192 mval min."1 Kitermelés: 64% 26% 3. 101 fermentlé 35 1 metanollal kicsapva: kitermelés 81 g enzimkészítmény 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
