188655. lajstromszámú szabadalom • Eljárás pektiniliáztartalmő enzimkomlex előállítására
1 188 655 2 32 °C hőmérsékleten rázatjuk. A 24 órás, tenyészet felhasználható fermentorok inokulumaként. Az Aspergillus niger OKI-00202 törzs a fenti táptalajon hasonlóképpen növekszik. 2. példa 9.5 liter 2% szárazanyag-tartalmú répakivonatba adagolunk 50 g (NH4)2S04-ot, 5 g KH2P04 -ot, 5 g MgS04- ot, 500 ml 2% szárazanyag-tartalmú korpakivonatot, valamint elemnyomokat (Co44, Mn++, Fe44 és Zn44) 10— 10 mg koncentrációban. A pH-érték 5,5. A táptalajt sterilezés után 1 liter 24 órás rázott Aspergillus niger OKI 00201 tenyészettel (1, példa) oltjuk be. A tenyészetet 460 ford, min-1 sebességgel keverjük és percenként 10 liter levegő átfuvatásával levegőztetjük 32 °C-on. A tenyésztést 54 órás korban állítjuk le, amikor is a micéliumhozam 5,9 g l”1 volt, a tenyész-szűrlet pektinliáz (PL)-aktivitása 3,151 /uniói rninT1 ml-1. PE-aktivitása pedig 1,56 mval min-1 ml-1. 3. példa 9.5 liter 3% szárazanyag-tartalmú répakivonat tápközeghez adagolunk 50 g (NH4)2S04-ot, 5 g KH2P04-ot, 5 g MgS04-ot, 500 ml korpakivonatot, valamint elemnyomokat (Co++, MnH, Fe44 és Zn++-sókat) 10—10 mg mennyiségben. A pH-t 5,0-ra állítjuk. A táptalajt sterilezés után 1 liter 24 órás rázott Aspergillus niger OKI 00201 tenyészettel (1. példa) oltjuk be. A tenyészetet 460 ford, min"1 sebességgel keveijük és percenként 15 liter levegő átfúvatással levegőztetjük 30 °C-on (OTR = 60 mm ól l”1 h"1 ). A tenyésztést 72 órás korban állítjuk le 5,0 g 1”* micéliumhozammal. A tenyész-szűrlet PL-aktivitása 4,437 /uniói min-1 ml-1 volt, PE-aktivitása pedig 1,88 mval min”? ml-1. 4. példa 9.5 liter 4% szárazanyag-tartalmú répakivonat tápközeghez 70 g (NH4)2S04-ot, 100 g KH2P04-ot, 5 g MgS04-ot, 500 ml korpakivonatot, valamint elemnyomokat (Co44, Mn44, Fe++ és Zn44) adagolunk 10—10 mg koncentrációban. A pH-t 5,0-re állítjuk. A táptalajt sterilezés után 1 liter 24 órás rázott Aspergillus niger OKI 00201 tenyészettel (1. példa) oltjuk be. A tenyészetet 460 ford, min“1 sebességgel keveijük és percenként 10 1 min 1 levegő átáramoltatásával levegőztetjük 30 °C-ra (OTR: 49 mmól l“1 h“1). A tenyészet micéliumhozama leállításkor (72 h) 7,1 g Γ1 volt. A tenyészszűrlet PL-aktivitása 5,666 /uniói min“1 ml"1, PE-aktivitása pedig 0,82 mval min“1 ml“1 -nek adódott. 5. példa 9.5 liter 2% szárazanyag-tartalmú répakivonatba adagolunk 100 g tcjsavóport, 60 g (NH4)2S04-ot, 10 g KH2P04-ot, 5 g MgS04-ot, valamint (Co44, Mn44, ZnH és Fe44) elemnyomokat 0,5—0,5 mg mennyiségben. A tápközeg pH-értékét 5,0-re állítjuk és sterilezés után 1 liter 24 órás rázott Aspergillus niger OKI 00201 tenyészettel (1. példa) oltjuk be. A tenyészetet percenként 10 liter levegő átfúvatásával levegőztetjük és 230 ford, min“1 sebességgel kevertetjük, (OTR: 12 mmól 1“ h“1). 72 órás tenyészet micéliumhozama 8,5 g l“1. a tenyész-szűrlet PL-aktivitása 0,267 /uniói min-1 ml“1 PE-aktivitása pedig 2,225 mval min“1 mF1. 6: példa 76 liter 3% szárazanyag-tartalmú répakivonatba adagolunk 400 g (NH4)2S04-ot, 80 g KH2P04-ot, 40 g MgS04-ot, 4 liter 2% szárazanyag-tartalmú répakivonatot, valamint elemnyomokat (Go , Mn44, Zn44 és Fe44) 80—80 mg mennyiségben. A pH-t 5,0-re állítjuk. A táptalajt sterilezés után 8 liter 24 órás vegetatív Aspergillus niger OKI 00201 tenyészettel (1. példa) oltjuk be. A fermentorban biztosított keverési sebesség 300 ford, min//, a levegőztetés intenzitása pedig 80 liter min“1. A tenyésztést 72 órás korban állítjuk le, amikor a micéliumhozam 7,5 g F1, a tenyész-szűrlet PL-aktivitása 2,424 /umól min”1 ml”1, volt. PE-aktivitása pedig 1,36 mval min“1 mT1 volt. A fermentlevet membránszűréssel besűrítve a kapott PL-aktivitás 8,0 jumól min”1 ml”1, a PE-aktivitás pedig 3,03 mval min”1 mf1, a kitermelés pedig 83%. 7. példa 76 liter vízben 2,4 kg répaszeletet 560 g (NH4)2S04- ot, 80 g KH2P04-ot, 40 g MgS04-ot 4 liter 2% szárazanyag-tartalmú korpakivonatot, 400 g kukoricalekvárt, valamint a elemnyomokat (Co44, Mn44, Zn44 és Fe44) adagolunk 80-80 mg koncentrációban. A pH-értéket 5,5-re állítjuk. A táptalajt sterilezés után 8 liter 24 órás vegetatív Aspergillus niger OKI 00201 tenyészettel oltjuk be. A fermentorban biztosított keverési sebesség 300 ford, min”1, a percenként átáramoltatott levegő menynyisége pedig 801 (OTR: 80 mmól l”1 h“1). A tenyésztést 80 órás korban állítjuk le és szűrjük. A micéliumhozam: 7 g l”1, a PL-aktivitás 1,15 /umól min“1 mT1, a PE-aktivitás pedig 3,03 mval min”1 mT1. A membránszűrésscl végzett sűrítés után a sűrítmény specifikus PL-aktivitása 16,56 /umól min”1 mT1, PE- aktivitása pedig 20,9 mval min”1 mT1. A PL-enzim kitermelése 92%, a PE kitermelése pedig 44%. 8. példa 76 liter 4% szárazanyag-tartalmú répaszelet-kivonatba adagolunk 480 g (NII4)2S04-ot, 800 g KH2P04-ot, 40 g MgS04-ot, 4 liter 2% szárazanyag-tartalmú korpakivonatot, valamint elemnyomokat (Co44, Mn44, Zn44 és Fe44) 80-80 mg mennyiségben. A pH-t 5,5-re állítjuk. A táptalajt sterilezés után 8 liter 24 órás vegetatív 4spcrgillus niger OKI 00201 tenyészettel oltjuk be. A keverési sebesség 300 ford, min“1, a levegő átáramoltatás pedig 80 liter percenként. Leálláskor a micéliumhozam 7,5 g T1, a fermentlé specifikus PL-aktivitása 1,909 /uniói min“1 mT1, PE- aktivitása pedig 1,204 mval min”1 mT1. A fermentlé folyamatos működésű filmbepárló készülékkel végzett besűrítése (32-40 °C, 75 lh“1 átfolyási sebességgel, 3-szori visszatáplálással) után a sűrítmény PL-aktivitása 10,330/umól min”1 ml“1, kitermelése pedig 84%. A sűrítmény specifikus PE-aktivitása 5,24 mval min“1 ml”1, kitermelése pedig 68%. 9. példa 9,5 liter 4% szárazanyag-tartalmú répaszelet-kivonatba adagolunk 70 g (NH4)2S04-ot, 100 g KH2P04-ot, 5 g MgS04-ot, 500 ml korpaldvonatot valamint elemnyomokat (Co44, Mn44, Fe44 és Zn44 sókat) 10-10 mg 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
