188565. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás új peptidek előállítására és ezek alkalmazási módja
47 188 565 48 2. Az FR—900156 jelzésű vegyületnek a kísérletes fertőzésekkel szemben mutatott védőhatását egereken határozzuk meg, a vizsgálati anyagot steril vízben oldjuk, és ugyancsak steril vízzel hígítás-sorozatot készítünk, amelynek minden egyes tagja háromszor hígabb, mint az előző. A kísérletekhez 4—4, DDY-törzsbeli, 6 hetes és átlagosan 24—26 g súlyú hím egereket használunk. Escherichia coli No. 22-t Difco táptalajon éjszakán át tenyésztünk, majd a tenyészetet friss táptalajjal 100-szorosra hígítjuk, és rázatás közben, 30 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Amikor elérjük az 1 x lO’/ml sejtsűrűséget, a tenyészet 0,2 ml térfogatú részletét intraperitoneálisan beadjuk az állatoknak. Valamennyi állat, amelyet megfertőzünk, és nem kezelünk a fenti vegyülettel, a fertőzést követő 48 órán belül elpusztul. A következő kísérletben 1, 4, 5 és 6 nappal a fertőzés előtt beadunk az állatoknak 0,2 ml FR— 900156-oldatot. A fertőzés után 2 nappal befejezettnek tekintjük a kísérletet, és ezen a napon határozzuk meg a túlélési %-ot. A kísérlet eredményeit all. táblázat tartalmazza. 11. táblázat Dózis (mg/egér/nap) Túlélő állatok száma Fertőzött állatok száma 0,01 10/10 0,003 10/10 0,001 10/10 0,0003 8/10 0,0001 4/10 kontroll 0/10 5. RÁK-ELLENES HATÁS E kísérlethez 3—3, Donru-törzsbeli, 6 hetes nőstény patkányokat használunk. Az állatokba ascites hepatoma AH 66 0,5 ml Hank-oldattal készült szuszpenzióját (5 x 104 sejt/ patkány) transzplantáljuk intraperitoneálisan. Körülbelül 13 nap alatt az összes kontrollállat elpusztul aszciteszben. A hatékonyság kritériumának azt tekintjük, hogy a vizsgált vegyület a kontrolihoz képest meghosszabbítja az állatok élettartamát. A következő kísérletben 5, 6, 7, 8 és 9 nappal a daganatsejtek transzplantációja előtt kezeljük az állatokat a vizsgált vegyülettel. Az FR—900156 jelzésű vegyületet steril fiziológiás sóoldatban oldjuk, és hígítás-sorozatot készítünk; a sorozat minden tagja háromszor hígabb, mint az előző. Az FR—900156 jelzésű vegyület fiziológiás sóoldattal készült oldatát intraperitoneálisan adagoljuk az állatoknak. A kísérlet eredményeit a 12. táblázat tartalmazza. 12. táblázat Dózis (mg/patkány/nap) Élettartam (nap) 1,0 14, > 30, > 30 0,3 13, > 30. > 30 0,1 13, > 30, > 30 0,03 13, 13, 13 kontroll 13, 13, 13 (fiziológiás sóoldat) 6. INTERFERON-INDUKCIÓS HATÁS A vizsgált vegyületek általános képlete : In. Ebben a kísérletben ICR-törzsbeli, 4—6 hetes hím egereket használunk. Az egerek lépét eltávolítjuk, és meghatározzuk, hogy a vizsgált vegyület hatására milyen mértékben képesek a lépsejtek in vitro interferont termelni. Az egyes lépsejt szuszpenziók készítéséhez RPMI—1640 közeget használunk, amelyben adalékként 100 gamma/ml sztreptomicin, 100 g/ml penicillin G, 1% glutamin és 5 x 10-5 mól merkaptoetanol van. A sejtszuszpenziókat — amelyek vagy tartalmaznak a táptalajban feloldott vizsgálandó vegyületeket (a dózisok: 100, 10, 1 /(g/ml), vagy nem tartalmaznak ilyen vegyületeket — 4xl06 7 * * * * * 13 sejt/ml sejtkoncentráció mellett, 37 °C hőmérsékleten tenyésztjük. 24 óra múlva e tenyészetek felülúszóját összegyűjtjük, és interferon-aktivitásukat L-sejt- VSV-rendszerben (VSV-rendszer: vesicularis stomatitis vírus-rendszer) a citopatikus hatás (CPE = cytopathic effect) gátlási teszttel határozzuk meg. Az antivirális titert az összehasonlító interferonmintához viszonyítva NE/ml (nemzetközi egység/ ml) egységben fejezzük ki. Az eredményeket a 13. táblázat tartalmazza. 13. táblázat Az aszimetriás Dózis Interferon szénatomok konfigu- (mikrogramm) titer rációja X1 X2 X3 x4 X5 (ml) (NE/ml) D L D L D 100 14 10 16 1 10 0 < 6,5 D L D DL 100 62 10 40 1 39 0 7,5 D D D L D 100 29 10 23 1 11 0 < 11 D D L L D 100 38 10 11 1 < H 0 < H 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 25
