188565. lajstromszámú szabadalom • Új eljárás új peptidek előállítására és ezek alkalmazási módja

35

188 565

36

2. kisérletsorozat

A vizsgált vegyületek általános képlete: In.

5. táblázat

Az asszimmetriás szénatomok konfigurációja

X! x2 x3 x4

x5

Dózis

(mikrogramm)

kezelési

hely

Celluláris immunitás, bőrreakció* (átmérő, mm, átlag± szórás)

Humorális immunitás hemagglutíná- hemolizinciós titer** titer**

(2-es alapú (2-es alapú logaritmus, logaritmus, (átlagzhszórás) (átlag±szórás)

D L

D

L

D

0

0

9,1±0,19 4,5±0,45

0,1

8,2±2,8***

9,9±0,10*** 6,4±0,76

1

14,5±2,1***

11,5±0,61*** 7,7±0,64***

10

11,0±1,3***

12,2±0,56*** 7,1 ±0,58

100

4,2±1,7***

10,0± 1,01 5,9±0,89

D L

L

L

D

0

0,9±0,9

8.5±0,4 —

1

2,4±1,5

10,4±0,5*** -10

7,9±2,1***

11,0±0*** —

D L

D

DL

0

0

9,2 ±0,3 5,9 ±0,1

1

4,3±1,8***

10,2 ±1,1*** 6,5±0,4

10

9,0±3,2***

10,4±0,3*** 7,5±1,2***

100

6,4±1,7***

10,9±0,2*** 6,7±1,2***

L L

D

L

D

0

0

6,8±0,3 —

1

6,7±0,8***

8,2±0,1*** —

10

10,2±1,6***

7,6±0,5*** —

Megjegyzések :

* a bőrkísérletet az állatok hátán végezzük oly módon, hogy 5 mikrogramm antigén 0,1 ml fiziológiás sóoldattal készült oldatát intradermálisan (a bőrbe) fecskendezzük. 48 óra múlva kiértékeljük a kísérleti helyen a bőrreakciót.

** az antitest-termelést a következőképpen értékeltük ki : az ovalbuminnal bevont birka vörös vértesteket króm-klorid segítségével állítjuk elő.

Az antitest-titer a szérum legnagyobb küszöbhígításának reciproka, amely már hemagglutinációt (a vértestek összecsapódását) és hemolízist (a vértestek festékanyagának kioldódása) idéz elő.

Az eredményeket 2-es alapú logaritmusra számítottuk át.

*** A szignifikanciát a Student-féle t-teszttel számítottuk; P < 0,05.

+! Az 5 állat közül 2 elpusztult centrális nekrózisban.

+2 Az 5 állat közül 1 elpusztult centrális nekrózisban.

3. MITOGÉN AKTIVITÁS MEGHATÁROZÁSA EGÉR LÉPSEJTEKEN (Anyagok és módszerek)

1. A kísérleti állatok :

E kísérlethez BALB/C törzsbeli hím, 13 hetes egereket (1. kísérletsorozat) vagy BALB/C nőstény, 9 hetes egereket (2. kísérletsorozat) használunk.

2. A szövettenyésztés közege:

A szövettenyésztéshez egy komplett közeget használunk, amelynek jelzése: Rosv.ell Park Memorial Institute (RPMI)—1640. Minden, itt alkalmazott közeg 100 egység/ml penicillin G-t, 100 gg/ml sztreptomicin-szulfátot és 10% borjú embriószérumot is tartalmaz.

3. A sejtkészítmény:

Az állatok lépét steril körülmények között eltávolítjuk, Hank-féle oldattal kimossuk és eldörzsöljük a szövettenyésztés közegében. A sejteket úgy szuszpendáljuk a szövettenyésztés közegében, hogy a sejtkoncentráció 8 x 106 sejt/ ml legyen.

4. A tenyésztés körülményei:

Egy Microtest II típusú szövettenyésztő lemez (8 x 12 üreg, előállítja: Falcon Plastics Co.) minden egyes üregébe beleöntünk 0,1 ml-t a fenti sejtszuszpenzióból, és az alábbiakban ismertetett, vizsgált vegyületek előírt töménységű oldatából 0,1 ml-t. Ezután a tenyészeteket hármasával 37 °C hőmérsékleten, nedvesített atmoszférában (95% levegő, 5% szén-dioxid) 48 órán át inkubáljuk.

A kontrolltenyészetbe a vizsgált anyagot tartalmazó közeg helyett 0,1 ml tenyészközeget teszünk.

5. 3H-Timidin-felvétel :

A tenyésztés utolsó 24 órás szakaszának kezdetén minden egyes üregbe bemérünk 20 gl 10 mikrocurie/ml aktivitású triciált timidin (3H- timidin)-oldatot. A tenyésztés befejezése után a

19

35

40

45

50

55

60

65