188425. lajstromszámú szabadalom • Eljárás B12 vitamint és egyéb korrinoidokat tartalmazó fermentlevek feldolgozására és B12-vitamin koncentrátumok előállítására
1 188 425 2 10 15 20 különítése útján is. Igen előnyösen alkalmazható az adszorpciós műveletek kivitelezésére az ismert mozgóágyas technológia is. A második adszorpciós lépésben, a sejtfeltárás után a hatóanyaggal együtt a gyantán megkötött szennyező anyagok szelektiv eltávolítása céljából az eluálás előtt alkalmazott vizes-bázikus kezelés során bázisos mosóoldatként előnyösen híg vizes ammónium-hidroxid-oldatot, célszerűen ammónium-hidroxiddal 8-12 pH értékre, előnyösen 9 10 pH értékre beállított vizet alkalmazhatunk. Alkalmazhatunk azonban erre a célra más alkalikus vizes oldatot, például kálium-hidroxid 10 pH értékű vizes oldatát is. A hatóanyagnak a gyantáról való eluálása ismert módon, például metanollal vagy vizes metanollal történhet. A találmány szerinti eljárással a sejtek feltárása utáni adszorpció adszorbensének bázisos-vizes kezelése utáni eluálása és az eluátum szárazra párlása útján kapott nyers termék a B12-vitamint és egyéb korrinoidokat messzemenően tisztított állapotban tartalmazó, vízben oldódó koncentrátum, amelynek a szárazanyag tartalomra vonatkoztatott biológiailag aktív korrinoid tartalma (hatóanyag tar- 25 talma) 10 -25% között van. Ez a nyers termék száraz állapotban közvetlenül felhasználható takarmánykiegészítő B, 2-vitamin-koncentrátumként, másrészt nagy tisztasága és koncentrációja folytán kitűnő kiindulási anyag, kristályos B12-vitamin és ún. 111. faktor (5-hidroxibenzimidazolil-cobamidcianid) előállítására. Minthogy az eredeti fermentlének a belőle nyert termék takarmányozási célra való alkalmazását rontó tulajdonságait, mint a kellemetlen szag, íz és az állati tápszerként való alkalmazás szempontjából tekintetbejövő egyéb hátrányos tulajdonságok, már a feltáratlan sejteket tartalmazó első adszorpciós kezelés során legnagyobbrészt eltávolítjuk, takarmánykiegészítő B12-vitamin készítmény előállítása során a találmány egyik célszerű foganatosítási módjaként a találmány szerinti eljárás első adszorpciós lépése után kapott tisztított fermentlevet már ebben az állapotban is felhasználhatjuk takarmánykiegészítő B12-vitamin-koncentrátum előállítására oly módon, hogy az első adszorpciós lépésben tisztított fermentléből - a sejtek feltárásának és a korrinoidok adszorpciós elkülönítésének elhagyásával - a hatóanyagot tartalmazó feltáratlan sejteket önmagában ismert módon, például centri- 50 fugálás útján elkülönítjük és az így kapott B, ^vitaminban és egyéb korrinoidokban gazdag, a kellemetlen szagú és a lipoid-szennyezésektől mentes biomasszát például porlasztvaszárítással megszárítjuk. Az előszárítás hatására csökken a fermentlé 55 fajsúlya, így a mikroorganizmusoknak a szeparálhatósága javul. így világos színű, kellemetlen szagtól mentes, 2-3 mg/g hatóanyagtartalmú, takarmánykiegészítőként közvetlenül felhasználható terméket kapunk. 60 A fentiek alapján a találmány szerinti eljárás előnyeit a következőkben foglalhatjuk össze: 1. Az eljárás két adszorpciós művelete és az ezek között történő sejtfeltárás folyamatosan, mindvégig az eredeti fermentlében folytatható le. Ez azzal 65 30 35 40 45 a technológiai szempontból igen jelentős előnnyel jár, hogy nincsen szükség a biomasszának az eljárás során való elkülönítésére. A 2 088 383 számú angol szabadalmi leírásban ismertetett eljárással összehasonlítva, lényeges előny, hogy nincs szükség eljárásunkban a B12-vitamin tartalmú sejtek elkülönítésére a fermentléből. Ezzel kiküszöböljük a szeparálás során le nem ülepedett sejtek okozta B12 veszteséget, a szeparátor alkalmazását és az időigényes műveletet; ez utóbbi bomlékony anyag esetében nagyon jelentős szempont. Ugyancsak előny, hogy a B)2-vitamin adszorpciója előtt nem szükséges semmilyen művelet, ellentétben a fenti szabadalmi leírásban ismertetett eljárással, amely extrakciós eljárás, így szükség van az ezzel járó sejtmaradékot elkülönítő, majd az extraktum bepárlási műveletre az adszorpció előtt. 2. Az első, sejtfeltárás előtti adszorpciós lépésben eltávolítjuk azoknak az extracelluláris szennyezéseknek a fő tömegét, amelyek az ismert eljárásokban a hatóanyaggal együtt kötődnek meg az adszorbensen, így lényegesen csökken a hatóanyag teljes megkötéséhez szükséges adszorbens mennyisége, vagyis növekszik az adszorbensnek a hatóanyagra számított kapacitása. 3. Az említett körülmények következtében a hatóanyag leoldására is lényegesen kevesebb eluensre van szükség, így a hatóanyag betöményítése jóval nagyobb mértékű. 4. Az első adszorpciós lépés tisztító hatása és a második adszorpciós lépésben a hatóanyaggal együtt adszorbeált szennyezéseknek az adszorbens bázisos-vizes kezelése útján történő szelektív eluciója folytán az eluált hatóanyag tisztasága nagy mértékben javul. Ezáltal érhető el, hogy a jelenleg forgalomban levő takarmánykiegészítő B12-vitamin készítmények általában 0,1-0,3%, kivételesen legfeljebb 2% hatóanyag tartalmúak, ezekkel szemben a találmány szerinti eljárással közvetlenül, további koncentrálási műveletek nélkül 10% és ezt meghaladó hatóanyag tartalmú készítmények állíthatók elő. 5. Az eljárás nagyüzemi méretekben is könnyen megvalósítható, nem igényel költséges, különleges berendezést. További előny, hogy az eljárás igen jól lefolytatható folyamatos feldolgozást lehetővé tevő mozgóágyas technológiával is. 6. Az első, sejtfeltárás előtti adszorpciós lépésben az extracelluláris szennyezések eltávolítása - már önmagában is - bármely, ezt a lépést követő feldolgozással nyert terméknek a felhasználó szempontjából jobb minőségét eredményezi. , A találmány szerinti eljárás gyakorlati kiviteli módjait közelebbről az alábbi példák szemléltetik. 1. példa Csatornaiszapból származó vegyes baktériumpopulációval végzett félfolyamatos anaerob fermentációból levett összesen 2 m3 1,5% szárazanyag-tartalmú, 6,3 pH-értékű fermentlevet, amely literenként 26 mg B12-vitamint és 4,2 mg III- faktort (5-hidroxi-benzimidazol-kobalamin) tartalmaz, kéttagú, sorbakapcsolt mozgóágyas adszorp-4
