188300. lajstromszámú szabadalom • Eljárás digoxin tisztítására és elkülönítésére
1 188 300 2 A kiindulási - például fermentációs úton kapott- glikozidkeverék oldására különösen előnyös metanol, szén-tetraklorid és diklór-etán 10:3:3 arányú, metanol, kloroform és szén-tetraklorid 10:3:1 arányú vagy metanol, kloroform és toluol 5:2:1 arányú elegyét használ htjuk. A glikozidkeverék fent leírt módon kapott szerves oldószeres oldatának vizes és/vagy vizes-metanolos bórsavoldattal történő extrahálását célszerűen a kiindulási glikozidkeverék súlyára számítva 0,4-0,6 súlyrészt bórsavat tartalmazó, 0,5-3 súly%os, előnyösen 1,5-2,5 súly%-os vizes bórsavoldattal végezzük. Az extrahálásra alkalmazott vizes illetőleg vizes-metanolos bórsavoldat víztartalmát célszerűen úgy szabjuk meg, hogy az extrakciós rendszerben (extrahálandó szerves oldószeres glikozidoldat metanoltartalmát is beleszámítva) jelenlevő metanol és víz aránya körülbelül 1:1 legyen. A szerves oldószeres fázis elkülönítése után a kapott vizes-metanolos fázist - az adott esetben még visszamaradt kísérő szennyezések eltávolítása céljából - szén-tetraklorid és diklór-etán előnyösen 1:1 arányú, vagy kloroform és toluol előnyösen 2:1 arányú, vagy kloroform és szén-tetraklorid előnyösen 3:1 arányú elegyével rázhatjuk ki. Az így kapott szerves oldószeres fázisokat azután - a vízzel nem elegyedő szerves oldószeres fázisokban esetleg még visszamaradt digoxin gyakorlatilag teljes kinyerése céljából - kívánt esetben egyesítjük a kiindulási glikozidkeverék szerves oldószeres oldatának vizes és/vagy vizes-metanolos bórsavoldattal történt extrahálása után visszamaradt szerves oldószeres fázissal, az egyesített szerves oldószeres fázist újból kivonatoljuk - célszerűen a kivonatolandó szerves oldószeres fázis térfogatára számítva 5-10% menynyiségű, előnyösen 0,5-2 súly% bórsvat tartalmazó- vizes-metanolos bórsavoldattal, az így kapott vizes-metanolos fázist egyesítjük az első extrakció során kapott vizes-metanolos glikozidoldattal és az így egyesített vizes-metanolos fázisból nyerjük ki a fent leírt módon a tisztított digoxint. A találmány szerinti eljárással izolált és tisztított digoxin súlya - a kiindulási glikozidok keverékben levő digoxin összmennyiségének 80-90%-a, tisztasága pedig meghaladja a 97%-ot. A tisztított termék 7-béta-hidroxi-digitoxint gyakorlatilag nem tartalmaz, digitoxin, gitoxin és diginatin szennyezése is lényegesen csökkent a kiindulási anyaghoz képest. A találmány szerinti eljárás fontos előnye az, hogy a digoxin és főleg a 7-béta-hidroxi-digitálisz-glikozidokat tartalmazó kísérő glikozidok elválasztását a fenilbórsavnál lényegesen olcsóbb és könnyebben hozzáférhető bórsavval oldottuk meg. A kapott digoxin tisztasága kifogástalan, a hozam pedig hasonló, vagy jobb, mint amint a fenilbórsavas kezelésre ismertet a szakirodalom. Járulékos előny, hogy az eljárás szerint a 7-béta-hidroxi-digitálisz-glikozidokból nem szükséges stabil, kovalens kötésű származékok izolálása és elválasztása a reagens visszanyerése céljából. A találmány szerinti eljárást az alábbi kiviteli példákkal szemléltetjük. 1. példa 78% digoxint, 6,3% 7-béta-hidroxi-digoxint, 3,5% digitoxint, 10% béta-hidroxi-digitoxint, 2,2% gitoxint és diginatint tartalmazó 1 g szekunder glikozidkeveréket 25 ml metanol és 15 ml 1:1 arányú széntetraklorid-diklóretán elegyé'ben feloldunk. A teljes oldódás után hozzáadunk 25 ml vízben oldott 0,5 g bórsavat, és jól összerázzuk az elegyet. Az alsó szerves fázist elválsztjuk, és még kétszer 15-15 ml 1:1 arányú széntetraklorid-diklóretán eleggyel a kirázást megismételjük. A szerves fázisokat egyesítjük, a vizes-metanolos fázist (fj) pedig félretesszük. Az egyesített szerves fázist 5 ml 1% bórsav tartalmú 1:1 arányú metanol-víz eleggyel extraháljuk. A kapott vizes-metanolos oldatot az előzővel (fi) egyesítjük, és a metanolt vákuumban eltávolítjuk. A kristályos anyagot szűrjük, vízzel mossuk és megszárítjuk. A termék súlya: 0,7 g. összetétel: 97,5% digoxin, 1,1% gitoxin + diginatin. A termék 7-béta-hidroxi-glikozidoktól mentes, ezek a szerves fázisban vannak és abból ismert módszerekkel kinyerhetők. 2. példa 50,8% digoxint, 25% 7-béta-hidroxi-digoxint, 2,5% gitoxint, 15,3% 7-béta-hidroxi-digitoxint és 6,4% gitoxint és diginatint tartalmazó 1 g szekunder glikozidkeveréket 25 ml metanol és 15 ml 1:1 arányú széntetraklorid-diklóretán elegyben feloldunk. A teljes oldódás után hozzáadunk 25 ml vízben oldott 0,5 g bórsavat és jól összerázzuk az elegyet. Az alsó szerves fázist elválasztjuk és még kétszer 15-15 ml 1:1 arányú széntetraklorid-diklóretán eleggyel megismételjük a kirázást. A szerves fázisokat egyesítjük, a vizes-metanolos fázist (fj) félretesszük. Az egyesített szerves fázist 5 ml 1% bórsav tartalmú 1:1 arányú metanol-víz eleggyel extraháljuk. A kapott vizes-metanolos oldatot az előzővel (fj) egyesítjük, és a metanolt vákuumban eltávolítjuk. A kristályos anyagot szűrjük, vízzel mossuk és megszárítjuk. A termék súlya: 0,4 g. összetétel: 97% digoxin, 1,3% gitoxin + diginatin. A termék 7-béta-hidroxi-glikozidokat nem tartalmaz, ezek a szerves fázisban maradnak és abból ismert módszerekkel kinyerhetők. 3. példa 50,8% digoxint, 25% béta-hidroxi-digoxint, 2,5% digitoxint, 15,3% 7-béta-hidroxi-digitoxint, 6,4% gitoxint és dignatint tartalmazó 1 g szekunder glikozidkeveréket 25 ml metanol és 10 ml 3:1 arányú kloroform-széntetraklorid elegyében feloldunk. A teljes oldódás után hozzáadunk 25 ml vízben oldott 0,5 g bórsavat és jól összerázzuk az elegyet. 5 10 15 20 25 30 '35 40 45 50 55 60 65
