188300. lajstromszámú szabadalom • Eljárás digoxin tisztítására és elkülönítésére
A találmány digoxin elválasztására és tisztítására vonatkozik szekunder Digitalis-glikozidok, főként 7-béta helyzetű hidroxilcsoportot tartalmazó szekunder Digitalis-glikozid-származékok és egyéb, a természetes kiindulási anyagokban előforduló, vagy azokból mikrobiológiai átalakítással nyert glikozidok elegyéből. A Digitalis-glikozidok kiemelkedő szerepe a szívgyógyászatban közismert. A vegyületcsalád műszaki-gazdasági nehézségek miatt teljes szintézissel nem állítható elő, ezért a vegyületeket természetes eredetű kiindulási anyagokból, főleg a Digitalis lanata feldolgozásával nyerik ki. Az utóbbi növényben azonban a digoxin nem önmagában, hanem rokonszerkezetű vegyületek, egyéb digitaloidok kíséretében fordul elő. A rokonszerkezetű kísérőanyagok az oligoszacharid oldallánc hosszában, minőségében és szubsztituenseiben, másrészt a szteroid aglikon-rész hidroxilcsoportjainak helyzetében különböznek egymástól. A kísérővegyületek kémiai és fizikai tulajdonságai nagymértékben hasonlók a digoxinhoz, emiatt az utóbbi kinyerése tiszta állapotban nehéz műszaki feladatot jelent és csak veszteségek árán valósítható meg. Mivel gyógyászati szempontból elsősorban a digoxin kinyerése fontos, a természetes glikozidkeverékek elválasztásánál is erre fektetik a fő hangsúlyt. Másrészt jelentős erőfeszítéseket tettek a digoxin mellett jelenlévő egyéb kísérő glikozidok, például a digitoxin digoxinná történő átalakítására mikrobiológiai eljárások segítségével. A 175 474. és 176 250. számú magyar szabadalmi leírások szerint a digitoxin mikrobiológiai átalakításánál a főtermékként képződött digoxin mellett melléktermékként a 7-béta-hidroxi digitoxin és a 7-béta-hidroxi-digoxin jelenik meg. A fermentációs eljárás eredményeképpen kapott glikozidkeverék tartalmazza az előbbieken kívül a kiindulási digitoxint kísérő társglikozidokat át nem alakított, illetve tovább hidroxilezett formában. A kísérővegyületek molekulatömege hasonló, szerkezetűk csak kismértékben tér el egymástól, erőteljesebb behatásokra elbomlanak. Elválasztásuk és ezzel a kiemelt jelentőségű kardiotonikum, a digoxin előállítása megfelelő minőségben a csekély oldhatósági, megoszlási és polaritási különbségek miatt a szokásos fizikai módszerekkel nagyon nehézkes és nagy veszteséggel jár. Az irodalomban ismeretesek olyan eljárások, melyek a társglikozidok származékképzésén alapszanak. Mind a 182 932. számú csehszlovák szabadalmi leírás [C. A. 94. 53 071w (1981)], mind Szeleczky és Láng eljárásában [Planta Med. 40, 320 (1980)] a koaxiális 1,3-diol jellegű társglikozidokat fenilbórsawal észterezik, és kihasználva a megváltozott fizikai tulajdonságokat, a származékokat oszlopkromatográfiás művelettel, illetve Szeleczky és Láng megoszlatással válsztják el a digoxintól. Az utóbbi közlemény szerzői megállapítják, hogy fenilbórsav helyett bórsavat alkalmazva stabil származék nem képződik, ezen az úton elválasztás nem hajtható végre. Ez utóbbi közleményekben leírt eljárások hátránya, hogy az elkülönítést származék képzésével oldják meg, amelyhez a drága és nehezen hozzáférhető fenilbórsavat használják. A származék képzésével, majd a fenilbórsav-észter hidrolízisével az elválaztás két további kémiai lépéssel bonyolultabbá vált, amelynek hozamcsökkentő hatása van. Nem alkalmazható ezen származékképzés továbbá a természetes eredetű glikozidszármazékokban előforduló valamennyi társglikozid elválasztására sem, mert a megfelelő származékképzés előfeltétele a koaxiális 1,3-diol szerkezet fennállása. Szeleczky és Láng fent idézett megállapításával elleniében azt találtuk, hogy a digoxinnak a 7-béta helyzetben hidroxilezett digitoxintól és/vagy digoxintól és adott esetben egyéb szennyező glikozidoktól való elválasztása bórsav alkalmazásával is igen előnyösen megvalósítható, mégpedig kovalens kötésű stabil származékok képződése és azok elbontásának szükségessége nélkül, ha az eltávolítandó szennyezéseket tartalmazó glikozidelegyet egy metanolt, valamint vizel nem elegyedő oldószert, mégpedig 1-3 szénatomos klórozott alifás szénhidrogént és adott esetben aromás szénhidrogént 10:2-10:8, előnyösen 10:3-10:7 tf. arányban tartalmazó szerves oldószerelegyben oldjuk, majd ezt a szerves oldószeres glikozidoldatot vizes és/vagy vizes-metanolos, 0,5-3 súly%-os bórsavoldattal kivonatoljuk, amikoris a kinyerni kívánt digoxin lényegileg szelektíven a vizes-metanolos fázisba megy át és onnan a metanol eltávolítása után kristályos alakban kinyerhető. Az eljárás hatásfoka még növelhető, ha az említett vizes illetőleg vizes-metanolos bórsavoldattal készített kivonatot az abban még adott esetben jelenlevő kísérő glikozidok eltávolítása céljából egy- vagy többféle 1-3 szénatomos klórozott alifás szénhidrogént és adott esetben aromás szénhidrogént tartalmazó, vízzel nem elegyedő szerves oldószereleggyel egyszer vagy többször kirázzuk, majd kívánt esetben az eljárás során kapott szerves oldószeres fázisokat egyesítjük, ismét kirázzuk vizesmetanolos bórsavoldattal, az így kapott vizesmetanolos fázisokat egyesítjük az eredetileg kapott vizes-metanolos bórsavas glikozidoldattal és ebből nyeljük ki a kísérő szennyezésektől mentesített digoxint. A találmány tehát olyan új eljárás digoxin tisztítására és elkülönítésére a 7-béta helyzetben hidroxilezett digitoxint és/vagy digoxint és adott esetben egyéb szennyező glikozidokat tartalmazó glikozidkeverékekből, amelynek során a kiindulási glikozidkeveréket metanol és egy- vagy többféle 1-3 szénatomos klórozott alifás szénhidrogént és adott esetben a klórozott alifás szénhidrogénekre számítva 0,4-0,6 rész aromás szénhidrogént tartalmazó, vízzel nem elegyedő szerves oldószer(elegy) 10:2-10:8, előnyösen 10:3—10:7 tf. arányú elegyében oldjuk, ezt az oldatot 0,5-3 súly% bórsavat tartalmazó vizes és/vagy vizes-metanolos oldattal extraháljuk, a kapott vizes metanolos glikozidoldatból - adott esetben ennek az említett vízzel nem elegyedő szerves oldószerrel illetőleg oldószerelegygyel történő kirázása, az egyesített szerves fázisoknak az említett vizes-metanolos bórsavoldattal való újbóli kirázása és a vizes-metanolos kivontok egyesítése után - a metanol főtömegét elpárologtatjuk és a kikristályosodó digoxint elkülönítjük. 5 IC 15 20 25 30 35 40 45 50 55 50 55
