188081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklopeptidek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 188 081 2 1.1 lépés dl-H-(/?-Fenil)Gaba-OBzl-p-toluolszulfonát 1,10 g d 1 -4-amino-3-fenil-vajsav és 1,17 g p-toluolszulfonsav-monohidrát elegyét 3,2 ml benzilalkoholban és 50 ml benzolban normál nyomáson lassan addig desztilláljuk, amíg 3 óra alatt összesen 40 ml, 70-90 °C forráspontú frakciót fel nem fogunk. A tiszta reakcióelegyet először vízsugárszivattyúval előállított, majd nagy vákuumban, körülbélül 60 °C-on 3 ml-re betöményítjük. A kivált kristálypépet 15 ml éterrel elkeverjük, a kristályokat leszűrjük és 10 ml éterrel mossuk. Ezt az anyagot további tisztítás céljából egy órán keresztül keverjük szobahőmérsékleten 10 ml éterrel, majd leszűrjük, éterrel mossuk és vákuumban megszárítjuk. Olvadáspont: 145-148 °C. DC: [kloroform-metanol-víz (14 : 6 : 1)]: Rf=0,40 [kloroform-metanol (85: 15)]: Rr=0,17 Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő az alábbi vegyületeket is: a) dl-4-amino-3-(2-naftil)-vajsavból a dl-H-[/l(2-naftil)]-Gaba-OBzl-p-toluolszulfonátot, DC: 157C számú rendszer: Rf=0,48 és b) dl-4-amino-3-(4-fluor-fenil)-vajsavból a dl- H-[/?-(4-fluor-fenil)]-Gaba-OBzl-p-toluolszulfonátot, DC: 157 számú rendszer: Rf=0,45. 1.2 lépés Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr( But)-Phe-[ d,l-( ß-fenil) G aba ]-O Bz I 500 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-OH (lásd a fentiekben hivatkozott európai szabadalmi bejelentés 1. példájának 1.7 lépését) és 189 mg dl-4-amino-3-fenil-vajsav-benzilészter-p-toluolszulfonát (1.1 lépés) 2 ml dimetilformamiddal készített elegyét összekeverjük 0,048 ml N-metil-morfolinnal, 58 mg N-hidroxi-benztriazollal és 104 mg N,N'-diciklohexil-karbodiimiddel, és az elegyet 20 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegy feldolgozása céljából a kivált N,N’-diciklohexil-karbamidot centrifugálással elkülönítjük, a felülúszót 15 ml vízzel összekeverjük és leszűrjük. A kapott szilárd anyagot ; további tisztítás céljából 10 percen át keverjük 3 ml etanollal, majd a szuszpenziót 0 °C-ra hűtjük, a; tiszta terméket leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. DC: [kloroform-metanol (85 : 15)]: Rf=0,70. Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő az 1.1 lépésben megadott, megfelelő vegyületekből az alábbia- Icát ’ a) Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-/d 1 -[/?-(2-naftil)]Gaba/-OBzl, DC: 157A számú rendszer: Rf=0,65; és b) Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-/d 1 -[/?-(4-fluor-fenii)]Gaba/-OBzl, DC: 157A számú rendszer: Rf=0,64. 1.3 lépés H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[dl-0?-fenil)-Gaba]-OH 453 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[dl-(/?-fenil)Gaba]-OBzl (1.2 lépés) 20 ml dimetilformamiddal készített oldatát 50 mg, aktív szénre felvitt palládium (10%) hozzáadása után 3 órán keresztül hidrogénezzük szobahőmérsékleten és normál nyomáson. A reakcióelegy feldolgozása céljából az oldatot a katalizátor kiszűrése után nagy vákuumban 2 ml-re betöményítjük, a terméket 25 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk, leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. A nyersterméket további tisztítás nélkül használjuk fel az 1.4 lépéshez (ciklizálás). Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő az 1.2 lépésben megadott megfelelő vegyületekből az alábbiakat: a) H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-/dl-[/?-(2-naftil)]Gaba/-OH; DC: 157C számú rendszer: Rf=0,67 és b) H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-/d 1 -[/?-(4-fluor-fenil)]Gaba/-OH, DC: 157A számú rendszer: Rf=0,06. 1.4 lépés ^ Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-(/?-fenil)Gaba~^ 386 mg nyers H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr-(But)-Phe-[dl-(/?-fenil)Gaba]-OH (1.3 lépés), 400 mg N-hidroxi-benztriazol és 610 mg N,N'diciklohexil-karbodiimid 300 ml dimetilformamiddal készített oldatát 20 órán keresztül 50 °C hőmérsékleten tartjuk. Feldolgozás céljából az oldószert nagy vákuumban, körülbelül 30 °C-on lepároljuk, és a maradékot 15 ml etilacetáttal eldörzsöljük. A kivált diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet etilacetáttal 50 ml-re felhígítjuk, három alkalommal, 40-40 ml n vizes oxálsav-oldattal, majd vízzel semlegesre mossuk, nátriumszulfát felett megszárítjuk és vákuumban bepároljuk. A nyersterméket tisztítás és az A és B diasztereomer elválasztása céljából 440-lépcsős ellenáramú megosztásnak vetjük alá metanol-víz-kloroform-széntetraklorid rendszerben (2700 : 675 : 900 : 1575 térfogatrész). A 104-155 fokozatokban kapott fázisok (K = 0,41) tartalmazzák a két diasztereomer egyikét (A izomer), míg a 164-207 fokozatokban található fázisok (K = 0,70) a másikat (B izomer). A megfelelő fokozatok fázisait egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml terc-butanolban feloldjuk és liofilizáljuk, így mindig egy, a fenti összegképletű, vékonyrétegkromatográfiásan egységes diasztereomert kapunk. ./DC: [kloroform-metanol (85-15)] A izomer: Rf=0,65, B izomer: Rf=0,55; [kloroform-metanol-víz (14 : 6 : 1)] A izomer: Rr=0,95, B izomer: Rf=0,90. Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő az 1.3 lépésben megadott, megfelelő vegyületekből az alábbiakat: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 9
