188081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklopeptidek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
188 081 2 a) L Asn-Phc-Phc-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(Bul)-Phe-[/?-(2-naftil)]-GabaJ A izomer: K=0,27; DC: 157A számú rendszer: Rr=0,39; B izomer: K = 0,51; DC: 157A számú rendszer: R, = 0,32, valamint b) CAsn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/?-(4-fluor-I fenil)]Gaba —* B izomer: K = 0,78; DC: 157A számú rendszer: Rf = 0,31. 2.A példa L- Asn-Phc-Phe-(D-lrp)-Lys-Thr-Phe-[/í-( 1 -naftil)]Gaba A izomer 250 mg EAsn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(Bul)-Phe-[/í-(l-naftil)]- I Gaba J A izomer képletű védett oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 2,5 ml, 89 térfogat% trifluorecetsavat, 10 térfogat% vizet és 1 térfogat“^ tioglikolsavat tartalmazó elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük, majd a terméket 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten 8 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk. A nyerstermék így kapott nyers trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsav-oldatban feloldjuk és 15 ml anioncserélőn, például acetát formában levő AG 1-X8 ioncserélőn (gyártja Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) leszűrjük, az eluátumot liofilizáljuk. A kapott, címben szereplő vegyület vékonyrétegkromatográfiásan, három rendszerben vizsgálva egységes: DC (cellulóz, Merck): 101 számú rendszer: Rf=0,60 111B számú rendszer: Rf=0,45 I12A számú rendszer: Rf=0,58 CD (1%-os vizes ecetsavban): 2(nm)/mol. Ellipt.: 226/8000 (min). 2.B példa I— Asn-Phe-Phc-(D-trp)-Lys-Thr-Phe-[/í-(l -naftil)]-Gaba —1-B izomer 257 mg I Asn-Phe-Phe(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/!-(l-naftil)]- I L Gaba —I-B izomer képletű védett oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 2,5 ml, 89 térfogat% trifluorecetsavat, 10 térfogat% vizet és 1 térfogat% tíolglikolsavat tartalmazó elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük, és a terméket 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten 10 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk. A végtermék így kapott nyers trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsav-oldatban feloldjuk, és 15 ml ioncserélőn (gyártja Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) átszűrjük, az eluátumot liofilizáljuk. A kapott, címben szereplő vegyület vékonyrétegkromatográfiásan, három rendszerben vizsgálva egységes. DC (cellulóz, Merck): 101 számú rendszer: Rr=0,57 111B számú rendszer: Rr=0,44 112A számú rendszer: Rf=0,53 CD (1%-os vizes ecetsavban): (nm)/mol. Ellipt.: 237/+ 6500 (max); 231/-7000 (min); 223/+ 12 000 (max). A 2.A és 2.B példában kiindulási anyagként alkalmazott peptideket az alábbi módon állítjuk elő. 2.1 lépés d 1 -H-[/í-( 1 -Naftil)]Gaba-OBzl-p-toluolszulfonát 1,05 g dl-4-amino-3-(l-naftil)-vajsav és 0,871 .g p-toluolszulfonsav-monohidrát 2,4 ml benzilalkohollal és 50 ml benzollal készített elegyét normál nyomáson, lassan addig desztilláljuk, amíg 3 óra alatt összesen 40 ml, 70-90 °C forráspontú frakciót fel nem fogunk. A tiszta reakcióelegyet először vízsugárszivattyúval előállított, majd nagy vákuumban, körülbelül 60 °C hőmérsékleten 3 ml-re be tömény ítj ük. A kivált kristálypépet 15 ml éterrel összekeverjük, a kristályokat leszűrjük és 10 ml éterrel mossuk. További tisztítás céljából ezt az anyagot szobahőmérsékleten, egy órán át keverjük 10 ml éterrel, majd leszűrjük, éterrel mossuk és vákuumban megszárítjuk. Olvadáspont: 152— 154 °C. DC: [kloroform-metanol-víz (14:6:1)]: Rr=0,60, [kloroform-metanol (85 : 15)]: Rf=0,28. 2.2 lépés Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-( 1 -naftil)]Gaba-0 Bzl 700 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-OH (1.2 lépés) és 295 mg dl-4- amino-3-( 1 -naftil)-vajsav-benzilészter-p-toluolszulfonát (2.1 lépés) 2 ml dimetilformamiddal készített elegyét összekeverjük 0,067 ml N-metilmorfolinnal, 81 mg N-hidroxi-benztriazollal és 147 mg N,N'-diciklohexil-karbodiimiddel, és a reakcióelegyet 20 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakcióelegy feldolgozása céljából a kivált N,N'-dicikIohexil-karbamidot kiszűrjük, a felülúszót 20 ml vízzel összekeverjük és leszűrjük. A kapott szilárd anyagot további tisztítás céljából 10 percen keresztül 3 ml metanollal keverjük, a szuszpenziót 0 °C-ra hűtjük, a tiszta terméket leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. DC: [kloroform-metanol (85 : 15)]: Rf=0,72, [kloroform-metanol-víz (14 : 6 : 1)]: Rr=0,93. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 10
