188081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklopeptidek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
188 081 2 a hatóanyag oldatban van, ezenkívül alkalmas hajtószert, továbbá szükség esetén egy további oldószert és/vagy egy stabilizálószert tartalmaznak. Hajtógáz helyett használhatunk nyomás alatti levegőt is, amelyet alkalmas sürítő- és kiterjesztő készülék segítségével szükség szerint állítunk elő. A találmány szerinti eljárással előállítható gyógyászati készítmények napi adagja 70 kg súlyú melegvérű esetében körülbelül 0,1 - körülbelül 120 mg hatóanyagnak megfelelő készítmény. A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákkal szemléltetjük. Rövidítésekként, például az aminosavak, peptidek, védöcsoportok stb. jelölésére az alábbi irodalmi helyeken megadott rövidítéseket használjuk: „Synthese von Peptiden” (kiadó: Wünsch, E.), Houben-Weyl: Methoden der organischen Chemie, XV. kötet, G. Thieme kiadó, Stuttgart, 1974. Különösen az alábbi rövidítéseket használjuk: Boc terc-butiloxikarbonilcsoport, But terc-butilcsoport (mint éterképző csoport), DCC N,N'-diciklohexil-karbamid, DCCI N,N'-diciklohexil-karbodiimid, Gaba 4-amino-vajsav-csoport,-NH-(CH2)3—CO—, OBzl benziloxicsoport, Z benziloxikarbonilcsoport, CD cirkulárdikroizmus, ORD optikai rotációs diszperzió, DC vékonyrétegkromatográfia. A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatokban, ha mást nem adunk meg, adszorbensként kovasavgélt és futtatószerként az alábbi rendszereket alkalmazzuk: Rendszer száma 52: n-butanol-ecetsav-víz (75 : 7,5 : 21) 101 : n-butanol-piridin-ecetsav-víz (38 : 24 : 8 : 30) 111B: n-butanol-piridin-25%-os vizes ammóniaoldat-viz (40 : 24 : 6 : 30) 112A n-butanol-piridin-hangyasav-víz (42 : 24 : 4 : 20) 157A: kloroform-metanol-víz-ecetsav (90 : 10 : 1 : 0,5) 157C: kloroform-metanol-víz-ecetsav (75 : 27 : 5 : 0,5) 157F: kloroform-metanol-víz-ecetsav (70 : 40 : 9 : 0,5) l.A példa I— Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys-Thr-Phe-(/?-fenil)Gaba —I - izomer A 160 mg védett, L Asn-Phe-Phe(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-(/f-fenil)Gaba —^ - izomer A képletű oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 1,5 ml, 89 térfogat% trifluorecetsavat, 10 térfogat% vizet és 1 térfogat% tiolglikolsavat tartalmazó elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük, és 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten a terméket 5 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk. A végtermék így kapott nyers trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsavoldatban feloldjuk és 15 ml anioncserélőn, például acetát formájú AG 1-X8 ioncserélőn (gyártja Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) átszűrjük, majd az eluátumot liofilizáljuk. A kapott, címben szereplő vegyület vékonyrétegkromatográfiásan, három rendszerben vizsgálva egységes DC (cellulóz, Merck): 101 számú rendszer: Rf=0,66, 111B számú rendszer: Rr=0,48, 112A számú rendszer: Rf=0,60. DC (vízben): 2(nm)/mol. Ellipt.: 235/-5800 (min); 223/+ 6600 (max.) Hasonlóképpen eljárva állítjuk elő az L- Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys-Thr-Phe-(Ar)Gaba -I képletű végterméket megfelelően védett oktapeptidekből: (Ar)Gaba=/?-(2-NaftiI)Gaba - izomer A DC: 157C számú rendszer: Rf 0,27; (Ar)Gaba=/?-(2-Naftil)Gaba - izomer B DC: 157C számú rendszer: Rf 0,27; (Ar)Gaba = /?-(4-Fluor-fenil)Gaba - izomer B DC: 157C számú rendszer: Rf0,29. l.B példa l— Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys-Thr-Phe-(/?-fenil)Gaba —^- izomer B 189 mg L Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys-(Boc)-Thr(But)-Phe-(/J-fenil)Gaba -I - izomer B képletű védett oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 1,9 ml, 89 térfogat% trifluorecetsavból, 10 térfogat% vízből és 1 térfogat% tioglikolsavból álló elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük, és a terméket 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten 5 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk. A végtermék nyers trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsavban feloldjuk és 15 ml anioncserélőn, például acetát formájú AG 1-X8 ioncserélőn (gyártja Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) átszűrjük. Az eluátomot vákuumban bepároljuk és a maradékot 270 lépcsős ellenáramú megosztásnak vetjük alá n-butanol-ecetsav-víz rendszerben (2400 : 600 : 3000). A 229-250 fokozatokban kapott fázisokat (K = 6,7) összegyűjtjük, vákuumban bepároljuk és 1 : 1 arányú terc-butanol-víz elegyből liofilizáljuk. A kapott, címben szereplő vegyület vékonyrétegkromatográfiásan, három rendszerben vizsgálva egységes. DC (cellulóz, Merck): 101 számú rendszer: Rf=0,64 111B számú rendszer: Rr=0,48 112A számú rendszer: Rf=0,58 CD (vízben): A(nm)/mol. Ellipt.: 235/-3700 (min); 220/ + 35 000 (max). Az l.A és l.B példában kiindulási anyagként alkalmazott peptideket az alábbi módon állíthatjuk elő. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 8
