188081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklopeptidek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 188 081 2 2.3 lépés H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-( l-naftil)]Gaba-OH 794 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[dl-/?-(l-naftil)]Gaba-OBzI (2.2 lépés) 40 ml dimetilformamiddal készített oldatát 80 mg, aktív szénre felvitt palládium katalizátor (10%) hozzáadása után 4 órán át szobahőmérsékleten és normál nyomáson hidrogénezzük. A reakcióelegy feldolgozása céljából az oldatot a katalizátor kiszűrése után nagy vákuumban 2 ml-re betöményítjük, a terméket 40 ml, peroxidmentes éterrel kicsapjuk, leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. A nyersterméket további tisztítás nélkül használjuk fel a 2.4 lépéshez (ciklizálás). 2.4 lépés LAsn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/?-(l-naftil)]Gaba —J 678 mg nyers H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-[d 1 -/?-(! -naftil)]Gaba-OH (2,3 lépés), 676 mg N-hidroxi-benztriazol és 1030 mg N,N'diciklohexil-karbodiimid 500 ml dimetilformamiddal készített oldatát 20 órán keresztül 50 °C hőmérsékleten tartjuk. A reakcióelegy feldolgozása céljából az oldószert nagy vákuumban, körülbelül 30 °C-on bepároljuk, és a maradékot 20 ml etilacetáttal eldörzsöljük. A kivált diciklohexil-karbamidot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet etilacetáttal 200 ml-re felhígítjuk, három alkalommal, 50-50 ml n vizes oxálsav-oldattal, majd vízzel semlegesre mossuk, nátriumszulfát felett megszántjuk és vákuumban bepároljuk. A nyersterméket tisztítás céljából 560-lépcsős ellenáramú megosztásnak vetjük alá metanol-víz-kloroform-széntetraklorid (2700:675:900:1575 térfogatrész) rendszerben. A 89-143 fokozatokban található fázisok (K = 0,22) tartalmazzák a két diasztereomer egyikét (A izomer), a 152-224 fokozatokban található fázisok (K = 0,47) a másikat (B izomer). A megfelelő fokozatok fázisait egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml terc-butanolban feloldjuk és liofilizáljuk, így mindig egy, a fenti öszszegképletü, vékonyrétegkromatográfiásan egységes diasztereomert kapunk. DC: [kloroform-metanol (85-15)]: A izomer: Rf=0,60, B izomer: Rf=0,50. 3.A példa L-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys-Thr-Phe-(/?-ciklohexil)-Gaba —I - A izomer 182 mg CAsn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-(/?-ciklohexil)- I Gaba J- A izomer képletű oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 1,8 ml, 89 térfogat% trifluorecetsavat, 10 térfogat% vizet és 1 térfogat% tiolglikolsavat tartalmazó elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük és a terméket 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten 6 ml 2 : 1 arányú hexán éter eleggyel kicsapjuk. A végtermék ily módon előállított nyers trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsav-oldatban feloldjuk és 15 ml anioncserélőn, például acetát formában levő AG 1-X8 ioncserélőn (gyártja Bio- Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) átszűrjük, az eluátumot liofilizáljuk. A kapott címben szereplő vegyület vékonyrétegkromatográfiásan három rendszerben vizsgálva egységes. DC: 101 számú rendszer: Rr=0,88, 111B számú rendszer: R, = 0,50, 112A számú rendszer: Rf=0,78. 3.B példa 1— Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys-Thr-Phe-(/?-ciklohexi!)-Gaba —I- B izomer 167 mg * 15 |Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(Bu()-Phe-(jS-ciklohexil)L— Gaba —- B izomer képletű védett oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 1,7 ml, 89 térfoga t% trifluorecetsavat, 10 térfogat% vizet és 1 térfogat% tioglikolsavat tartalmazó elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük, és a terméket 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten 6 ml 2 : 1 arányú hexán-éter eleggyel kicsapjuk. A végtermék így kapott, nyers trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsav-oldatban feloldjuk és 15 ml anioncserélőn, például AG 1-X8 ioncserélőn (gyártja Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) átszűrjük, az eluátumot liofilizáljuk. A kapott, címben szereplő vegyületet vékonyrétegkromatográfiásan, három rendszerben vizsgálva egységes. DC: 101 számú rendszer: Rf=0,83, 111B számú rendszer: Rf=0,75, 112A számú rendszer: Rr=0,70. A 3.A és 3.B példában kiindulási anyagként alkalmazott vegyületeket az alábbi módon állítjuk elő. 3.1 lépés dl-H-(/?-Ciklohexil)Gaba-OBzI-p-toluolszulfonát 0,50 g dl-4-amino-3-ciklohexil-vajsav-hidroklorid és 0,428 p-toluolszulfonsav-monohidrát 1,2 ml benzilalkohollal és 40 ml benzollal készített elegyét normál nyomáson lassan addig desztilláljuk, amíg ? óra alatt összesen 30 ml, 70-90 °C forráspontú frakciót fel nem fogunk. A tiszta reakcióelegyet vizsugárszivattyúval előállított, majd nagy vákuumban, körülbelül 60 °C hőmérsékleten 3 ml-re betöményítjük. A kivált kristálypépet 15 ml éterrel elkeverjük, a kristályokat leszűrjük és 10 ml éterrel mossuk. További tisztítás céljából ezt az anyagot szobahőmérsékleten, egy órán át keverjük 10 ml 5 10 15 20 25 30 '35 40 45 50 55 60 65 11
