188081. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új ciklopeptidek és az azokat tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
1 188 081 2 éterrel, majd leszűrjük, éterrel mossuk és vákuumban megszárítjuk. DC: [kloroform-metanol-víz (14 : 6 : 1)]: Rr=0,48, [kloroform-metanol (85 : 15)]: Rf=0,15. 3.2 lépés Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-(d 1 -/?-ciklohexil)Gaba-OBzl 1,06 g Z-Asn-Ph’e-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-OH (1.2 lépés) és 448 mg dl-4- amino-3-ciklohexil-vajsav-benzilészter-p-toluolszulfonát (3.1 lépés) 5 ml dimetilformamiddal készített elegyét összekeverjük 0,111 ml N-metilmorfolinnal, 123 mg N-hidroxi-benztriazollal és 223 mg N,N'-diciklohexil-karbodiimiddel, és az elegyet 20 órán keresztül szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Az elegyböl feldolgozás céljából centrifugálással eltávolítjuk a kivált N,N'-diciklohexilkarbamidot, a felülúszót összekeverjük 20 ml vízzel és leszűrjük. Az így kapott szilárd anyagot a további tisztítás céljából 10 percen át 3 ml metanollal keverjük, a szuszpenziót 0 °C-ra hütjük, a tiszta terméket leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. DC: [kloroform-metanol (85 : 15)]: Rf=0,80, [kloroform-metanol-viz (14 : 6 : 1)]: Rr=0,95. 3.3 lépés H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-(d 1 -/?-ciklohexil)-Gaba-OH 980 mg Z-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr(But)-Phe-(dl-/?-ciklohexil)Gaba-OBzl (3.2 lépés) 50 ml dimetilformamiddal készített oldatát 100 mg, aktív szénre felvitt palládium (10%) hozzáadása után 4 órán át hidrogénezzük szobahőmérsékleten és normál nyomáson. Az elegy feldolgozása céljából az oldatot a katalizátor kiszűrése után nagy vákuumban 2 ml-re betöményítjük, a terméket 40 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk, leszűrjük és vákuumban megszárítjuk. A nyersterméket további tisztítás nélkül használjuk fel a következő 3.4 lépéshez (ciklizálás). 3.4 lépés ^ Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-(/?-cilclohexil)Gaba 836 mg nyers H-Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)Thr-(But)-Phe-(dl-/?-ciklohexil)Gaba-OH (3.3 lépés), 860 mg N-hidroxi-benztriazol és 1.31 g N,N'diciklohexil-karbodiimid 640 ml dimetilformamiddal készített oldatát 20 órán keresztül 50 °C hőmérsékleten tartjuk. Az elegy feldolgozása céljából az oldószert nagy vákuumban, körülbelül 30 °C hőmérsékleten lepároljuk, és a maradékot 20 ml etilacetáttal eldörzsöljük. A kivált diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk, a szűrletet etilacetáttal 200 ml-re felhígítjuk, három alkalommal 50-50 ml n vizes oxálsav-oldattal, majd vízzel semlegesre mossuk, nátriumszulfát felett megszárítjuk és vákuumban bepároljuk. A nyersterméket tisztítás céljából 400-lépcsős ellenáramú megosztásnak vetjük alá metanol-kloroform-víz-széntetraklorid rendszerben (2700:900:675:1575 térfogatrész). A 81-108 fokozatokban található fázisok (K = 0,30) tartalmazzák a két diasztereomer egyikét (A izomer), a 120-147 fokozatokban található fázisok (K = 0,49) a másikat (B izomer). A megfelelő fokozatok fázisait egyesítjük és vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml terc-butanolban feloldjuk és liofilizáljuk, így mindig egy, fenti összegképletü, vékonyrétegkromatográfiásan egységes diasztereomert kapunk. DC: [kloroform-metanol (85:15)] A izomer: Rf=0,51, B izomer: Rf=0,42. 4.A példa ^ Asn-Phe-Phe.(D-trp)-Lys-Thr-Phe-[/?-(3-fcnoxi-fenil)]Gaba -I- A izomer 280 mg I Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/í-(3-fenoxi- I— fenil)]Gaba —- A izomer képletű védett oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 2,8 ml, 89 térfogat% trifluorecetsavat, 10térfogat% vizet és 1 térfogat% tioglikolsavat tartalmazó elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük és a terméket 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten 25 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk. A végtermék így előállított nyers trifluoracetátját leszűrjük, vákuumban megszárítjuk, 5 ml n ecetsav-oldatban feloldjuk és 15 ml anioncserélőn, például AG 1-X8 ioncserélőn (gyártja Bio-Rad Laboratories, Richmond, California, Amerikai Egyesült Államok) átszűrjük, az eluátumot liofilizáljuk. A kapott, címben szereplő vegyület vékonyrétegkromatográfiásan, három rendszerben vizsgálva egységes. DC: 52 számú rendszer: Rf = 0,49, 111B számú rendszer: Rf=0,40, 157F számú rendszer: Rf=0,53. CD: 1%-os vizes ecetsavban: 2/mol Ellipt. [nm/fok • cm2 • dmol1]: 210/-37430(min); 222/- 534(max); 230/— 15506(min). 4.B példa L Asn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys-Thr-Phe-[/?-(3-fenoxi-fenil)]Gaba -I- B izomer 268 mg LAsn-Phe-Phe-(D-trp)-Lys(Boc)-Thr(But)-Phe-[/?-(3-fenoxifenil)]Gaba —- B izomer képletű védett oktapeptidet 5 °C hőmérsékleten, nitrogén atmoszférában feloldunk 2,7 ml, 89 térfoga t% trifluorecetsavat, 10 térfogat% vizet és 1 térfogat% tioglikolsavat tartalmazó elegyben, az oldatot azonnal 25 °C-ra melegítjük, és a terméket 50 perc múlva ezen a hőmérsékleten 30 ml peroxidmentes éterrel kicsapjuk. A végtermék így kapott nyers 5 10 15 20 25 30 35 40 45 i° 55 60 65 12
