188079. lajstromszámú szabadalom • Eljárás isztamicin B 3-O-demetil-származékok előállítására
1 188 079 2 tere. butoxikarbonil-3-O-demetilisztamicin B0-t a 4-metilamino-csoporton N-hidroxiszukcinimid észterrel vagy N-benziloxikarbonilglicinnel acilezzük és így a (IV) képletű vegyület N-védett intermedier vegyületet kapunk, ahol R' jelentése tere. butoxikarbonil-csoport, és B jelentése benziloxikarbonil-csoport. A formimídoilezési lépésben az iminoéter reagens általános képlete R"OCH=NH - ahol R" jelentése rövidszénláncú alkilcsoport, aralkilcsoport, például benzilcsoport vagy savaddíciós só, például hidroklorid és szulfát. Előnyösen iminoéter-hidrokloridot, például etilformimidát-hidrokloridot és benzilformimidát-hidrokloridot használunk. A reakciót szerves oldószerben, például dioxánban és metanolban vagy vizes oldatban végezhetjük 30 °C alatti hőmérsékleten ismert módon. A kapott (VI) képletű l,2',6'-tri-N-védett-3-0- demetil-2"-N-formimidoil-isztamicin B-t vagy savaddíciós sóját szilikagél oszlopon kromatografálással tisztíthatjuk. A (VI) képletű vegyület 1- és 2'-aminocsoportját és a 6'-metilamino-csoportját a visszamaradó amino-védőcsoportokat a fent leírt ismert módon eltávolíthatjuk és így a kívánt (Ic) képletű 3-O-demetil- 2"-N-formimidoil-isztamicin B-t kapunk. A találmány szerint előállított 3-O-demetilisztamicin B és a 3-0-demetil-2''-N-formimidoil-isztamicin B igen erős antibakteriális hatású és állatokon alacsony toxieitású. Ennek megfelelően a vegyületeket az ismert antibakteriális antibiotikumokhoz hasonlóan alkalmazzuk és ismert gyógyászati formákban szereljük ki és az ismert antibiotikumokhoz hasonló módon adagoljuk. A találmány szerint 3-O-demetilisztamicin B-t vagy 3-O-demetil-2"-N-formimidoil-isztamicin B-t vagy gyógyászatilag elfogadható savaddíciós sóját és gyógyászatilag elfogadható hordozót tartalmazó gyógyászati készítményeket állítunk elő. Az új vegyületek előnyös dózisait a használt vegyülettől függően, a készítménytől függően, az adagolás módjától, a helyzettől, és a kezelendő szervezettől függően állapítjuk meg. A gyógyszer hatását sokféle tényező befolyásolja, ezeket a szakember figyelembe veszi. Ilyen tényezők lehetnek például a beteg kora, testsúlya, neme, diétája, az adagolás időtartama, módja, a kiválasztás sebessége, a gyógyszerkombinációk, a reakcióérzékenység és a betegség súlyossága. Az optimális adagolási módot adott körülmények között a szakember a szokásos dózismeghatározási teszttel állapíthatja meg a fenti irányvonalak szempontjából. Az alábbi példákkal a találmány további részleteit világítjuk meg. 1. példa 3-O-demetilisztamicin B0 előállítása 500 mg (1,27 mmól) isztamicin B0-monokarbonátot 50 ml 48%-os hidrogénbromidban feloldunk és az oldatot lezárt csőben 90-93 °C-on 4 óráig melegítjük. Az oldatot vákuumban szárazrapároljuk és a maradékot 50 ml vízben feloldjuk. Az oldat pH-ját ezután 7 m vizes ammónia hozzáadásával 8,5-re állítjuk be, majd 21 * 550 mm-es, 200 ml CM-Sephadex C-25 NH4-formájú oszlopon engedjük keresztül (Pharmacia Co., Svédország gyártmánya). Az oszlopot fokozatosan 1120 ml 0,15 m vizes ammóniával és 1120 ml 0,7 M vizes ammóniával eluáljuk. Az eluátumot 16 ml-es frakciókban gyűjtjük. A 85—102-ig terjedő frakciókat összeöntjük és vákuumban szárazrapároljuk. 275 mg 3-O-demetilisztamicin B0-dikarbonátot kapunk színtelen por formájában. Termelés: 49%. 2. példa 3-O-demetilisztamicin B előállítása 150 mg (0,34 mmól), az 1. példában kapott 3-O- demetilisztamicin B0-dikarbonátot 12 ml metanolban oldunk és az oldathoz 329 mg (1,34 mmól) N-benziloxikarboniloxi-szukcinimidet adunk 2 óra alatt keverés közben, miközben az elegyet - 10 °C-ra hűtjük. Az elegyet további 2 óráig keverjük, az oldatot vákuumban bepároljuk és a kapott szirupot 25 ml kloroformban feloldjuk. Az oldatot 2 x 8 ml vízzel mossuk és a kloroformos réteget vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd vákuumban szárazrapároljuk. l,2',6'-tri-N-benziloxikarbonil-3-O-demetilisztamicin B0 nyers port kapunk. A port 9 ml dioxánban feloldjuk és az oldathoz 0,5 ml trietilamint és 250 mg (0,82 mmól) N(N-benziloxikarbonil-gliciloxi)-szukcinimidet adunk. Az elegyet 2 óráig keverés közben 55 °C-ra melegítjük. Az oldatot vákuumban koncentráljuk és a maradékot 25 ml kloroformban feloldjuk és 2 x 8 ml vízzel mossuk. A kloroformos réteget vízmentes nátrium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban szárazrapároljuk. 389 mg nyers port kapunk. A port 30 g Wako gél C-200 szilikagéloszlopon kromatografáljuk (Wako Pure Chemical Industries, Ltd., Japán gyártmánya; az oszlop mérete: 14 x 350 mm). Az oszlopot etilacetát és toluol 5 : 2 térfogatarányú elegyével hívjuk elő és így 83 mg l,2',6'2"-tetra-N-benziloxikarbonil-3-0-demetilisztamicin B-t kapunk színtelen por formájában. A port 5 ml metanol, 1 ml víz és 0,5 ml ecetsav elegyében feloldjuk és az oldatot hidrogénáramban 15 mg 5%-os palládium/csontszén katalizátor jelenlétében hidrogenolizáljuk szobahőmérsékleten 1,5 óráig. A katalizátor a Kawaken Fine Chemical Company, Japán cég terméke. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk és az oldatot vákuumban szárazrapároljuk. 60,9 mg nyers port kapunk. 60 mg nyers port 3 ml vízben feloldunk és az oldat pH-ját vizes ammónia hozzáadásával 8-ra állítjuk be. Az oldatot 8 x 95 mm-es NH4-formájú 5 ml Amberlite CG-50-t tartalmazó oszlopon engedjük keresztül, amely a Rohm et Haas Co., amerikai egyesült államokbeli cég gyártmánya. Az oszlopot 10 ml vízzel mossuk, majd 70 ml 0,2 m vizes ammóniával és 70 ml 0,8 m vizes ammóniával fokozatosan eluáljuk. Az eluátumot 1,4 ml-es frakciókban gyűjtjük. A 22-38. frakciókat összeöntjük és vákuumban szárazrapároljuk. 35,5 mg 3-O-demetilisztamicin B-szeszkvikarbonátot kapunk színtelen por formájában. Termelés: 23%. 5 10 15 20 25 30 3b 40 45 50 55 60 65 6
