188077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új antibiotikus hatású BMG162-AF2 előállítására
1 188 077 2 a: E = elliptikus vagy hengeres; S = gömbalakú vagy megközelítően az; C = centrális; T = terminális vagy szubterminális; CT = centrális és terminális közötti, törzsön belül vagy törzsek közötti variáció; + = a törzsek 90-100%-a esetén pozitív; - = a törzsek 90-100%-a esétén negatív; d = a reakciók eltérőek, a törzsek 11-89%-a esetén pozitívak; v = a jellemző egy adott törzsben nem állandó b: kísérleti eredmény B. brevis B. sphaericus BMG162-aF2 E S elliptikus + + + CT T C + vagy -— '+ — — — — — — 0,6-43,9 0,6-1 0,6-0,8 1,5-4 1,5-5 2-3,5 d és v d és v d és v+ + + + 4IU60 30-45 40 ‘ 10-35 5-15 15 — — — d+ — — — — — +d — d d ± + + — + 5 napos tenyészet d — + + d + ++ — + — Összehasonlítottuk a BMG162-aF2 törzset a National Institute of Animal Health (Nemzeti Állategészségügyi Intézet) japán közintézmény által rendelkezésünkre bocsátott B. laterosporus törzszsel, és arra a megállapításra jutottunk, hogy mindkét törzsnek kenu-alakú teste van (azaz kenu-alakban megfestödő része, úgynevezett parasporális teste) a spórák egyik oldalán, ami megkülönböztető jellemző. Ugyanakkor Sabouraud-féle dextróztartalmú agar-agaron a kétféle törzs növekedése egymással koincidenciában van. így megállapítható, hogy a BMG162-aF2 törzs a Bacillus laterosporus specieszhez tartozik és ezért a Bacillus laterosporus BMG162-aF2 megnevezést viselheti. A BMG162-aF2 törzset 1979. október 12-én a Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology nevű japán törzsgyűjteményben (Inage, Chiba-City, Japán) FERMP 5230 számon, illetve 1981. július 31-én az American Type Culture Collection amerikai törzsgyűjteményben (Parklawn Drive, Rockville, Maryland állam) ATCC-31 932 szám alatt deponáltuk. A leíráshoz csatolt rajzokon látható ábrák közül az 1. ábra a BMG162-aF2 antibiotikum hidrokloridjának ‘H-NMR-spektruma, amelyet 100 MHzen De-DMSO-ban belső standardként tetrametilszilánt használva vettünk fel. A 2. ábrán ugyanezen vegyület 13C-NMR-spektruma látható, amelyet 25 MHz-en deutérium-oxidban külső standardként tetrametil-szilánt használva vettünk fel. A 3. ábrán ugyanezen vegyület 15N-NMR-spektruma látható, amelyet 10 MHz-en deutérium-oxidban külső standardként NH415NÖ3-ot használva vettünk fel. A 4. ábrán ugyanezen vegyület infravörös spektruma látható, amelyet kálium-bromid pasztillában vettünk fel. A BMG162-aF2 antibiotikum tehát a találmány értelmében a Bacillus genuszhoz tartozó, BMG162- aF2 antibiotikumot termelni képes törzs vagy mutánsa spóráinak vagy pálcikáinak aeorob körülmények között tápanyagokat tartalmazó táptalajon végzett tenyésztése útján állítható elő. Általában a találmány szerinti eljárás megvalósítása céljából a szokásos baktériumok tenyésztésére rendszerint alkalmazott táptalajok komponenseit hasznosíthatjuk. így például nitrogénforrásként kereskedelmi forgalomban kapható pepton, hús-extraktum, kukoricalekvár, gyapotmagliszt, földimogyorólíszt, szójababliszt, élesztő-extraktum, N-Z amin, kazein hidrolizátum, nátrium-nitrát, ammónium-nitrát vagy ammónium-szulfát hasznosítható. Ugyanakkor szénforrásként például kereskedelmi forgalomban kapható glicerin, szacharóz, keményítő, glükóz, maltóz, melasz és más szénhidrogének, valamint zsírok és olajok hasznosíthatók. Â fenti komponenseken túlmenően a táptalaj só-komponenseként például nátrium-klorid, foszfátok, kálciumkarbonát, magnézium-szulfát és más szervetlen sók alkalmazhatók. Más fémsók és egyéb komponensek is alkalmazhatók, feltéve, hogy a BMG162-aF2 antibiotikumot termelő törzs hasznosítja őket és jelenlétük nem hátrányos a BMG162-aF2 antibiotikum képződése szempontjából. Más szavakkal, a találmány szerinti eljárásban bármely olyan tápanyag hasznosítható, amelyet egy, BMG162-aF2 antibiotikumot termelni képes törzs asszimilálni tud az antibiotikum előállítása céljára. Ipari méretű antibiotikum-termelés céljára a folyékony táptalajon végrehajtott tenyésztést tartjuk előnyösnek. A tenyésztés során bármely olyan hőmérsékleten dolgozhatunk, amelyen egy, BMG162- aF2 antibiotikumot termelni képes törzs növekedni és így az említett antibiotikumot termelni képes, de különösen előnyösen 20 °C és 35 °C közötti hőmérsékleten hajtjuk végre a szükséges inkubálást. A táptalaj pH-értéke 5,0 és 8,2, előnyösen 6,0 és 7,8 között változhat. A tenyésztést annyi időn át folytatjuk, míg a tenyészetben kielégítő mennyiségű antibiotikum képződik, illetve akkumulálódik. így például egy napos inkubálást követően a BMG162- aF2 antibiotikum képződése és akkumulációja figyelhető meg, ha 2,0% glicerinből, 2,0% glükózból, 1,0% peptonból, 0,3% élesztő-extraktumból és 0,2% kalcium-karbonátból a leginkább célszerűen 7,4 körüli pH-értékű táptalajt állítunk elő, majd a táptalajt sterilizáljuk és beoltjuk a BMG162-aF2 törzs ferde tenyészetéből elküíönített spórákkal és pálcikákkal, ezt követően pedig forgatás és rázatás 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 5
