188077. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az új antibiotikus hatású BMG162-AF2 előállítására
1 188 077 2 talajhoz nátrium-kloridot adunk olyan mennyiségben, hogy koncentrációja 2, 5 vagy 7% legyen. Ezután a táptalajokat a törzzsel beoltjuk, majd a törzs szaporodását a tenyészet felületén 4 napon át figyeljük. A 2% nátrium-kloridot tartalmazó tenyészetben szaporodás figyelhető meg, míg a 2%-nál több nátrium-kloridot tartalmazó tenyészeteknél már nem. (22) Hippursav lebontásával kapcsolatos teszt 1000 ml szív-infúziós táptalajhoz (a Difco amerikai egyesült államokbeli cég terméke) 10 g hippursav-nátriumsót adunk, majd az így kapott, 7,4-es pH-értékű táptalajt beoltjuk a törzzsel és ezután 4 napon át inkubálást végzünk. Ezt követően a hippursav lebomlása észlelhető vas(III)-klorid-oldattal. (23) Fenil-piroszőlősavval végzett teszt 3 g élesztő-kivonatból, 2 g D,L-fenil-alaninból, 1 g nátrium-hidrogén-foszfátból, 5 g nátriumkloridból, 12 g agar-agarból és 1000 ml ionmentesített vízből álló, 7,3-es pH-értékű ferde tenyészetet sűrűn beoltunk, majd 24 órán át inkubálást végzünk. Ezt követően a 10%-os vas(III)-klorid-oldattal fenil-pirosszőlősavra végzett vizsgálat eredménye negatív. (24) Tirozin oldásával kapcsolatos kisérlet 1000 ml agar-agar alapú táptalajból és 5 g tirozinból álló, 7,2-es pH-értékü táptalajon 30 °C-on és 37 °C-on végzett inkubálás során 2-4 napos inkubálást követően a tirozin oldódása figyelhető meg. A fentiekben felsorolt tulajdonságok tehát a következőképpen foglalhatók össze: A BMG162-aF2 törzs olyan bacillus, amely fakultative anaerob, nem állandó Gram-reakciót mutat, mozgékonyságot tanúsít és spórája, valamint ostora van. A spóra centrális elliptoid, amelynek olyan rész (parasporális test) van, amely kristályibolyával kenu-alakban jól festhető és hővel szemben ellenálló. A pálcikák jól láthatóan duzzadtak és nem savállók, továbbá a törzs szétterjed és szaporodik agar-agar táptalajon és hártyát képez folyékony táptalajban. Elfolyósítja a zselatint és peptonizálja a bróm-krezolvöröst tartalmazó tejet, a színezék színét kékre változtatva. Sabouraud-féle dextróztartalmú folyékony táptalajon nem, míg Sabouraud-féle dextróztartalmú agar-agaron gyengén növekszik. Redukálja a nitrátokat, de denitrifikációs reakciója negatív. Metílvörös-tesztje pozitív és Voges-Proskauer tesztje negatív. Indol tenyésztése ötödik napján kimutatható és hidrogén-szulfidot nem képez. Nem bontja le a keményítőt és nem hasznosítja a citromsavat. Az ureáz, oxidáz és kataláz tesztek eredménye negatív, pozitív, illetve negatív. Növekedés figyelhető meg 5,0 és 8,2 közötti pH-tartományban, az optimális tartomány pedig 6,0 és 7,8 közötti. A növekedés megfigyelhető 15 °C és 40 °C között, 37 °C körüli optimummal. A növekedés észlelhető aerób körülmények között is. Lebontja a glükózt oxidativ és fermentativ körülmények között és savat képez. D-glükózból, D-mannózból, D-fruktózból, D-mannitból, maltózból, trehalózból és glicerinből savat képez, gázt viszont nem. Nem oxidálja a glükonsavat és dihidroxiacetont sem képez. Nem bontja le a hippursavat és a fenil-alanint és oldja a tirozint. Nem növekszik 2%-nál több nátrium-kloridot tartalmazó táptalajon. A BMGl62-aF2 törzs fenti jellemzői alapján megállapítható, hogy a törzs a Bacillus gemiszhoz, de elsősorban a Bacillus firmus, Bacillus laterosporus, Bacillus brevis vagy Bacillus sphaericus specieszekhez tartozik. Ezek olyan specieszek, amelyeknek közös tulajdonságaik vannak, mégpedig kataláz-pozitívak és nem képeznek dihidroxi-acetont (lásd a Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology 8. kiadásának 542. oldalán; a könyv Buchanan, R. R. és Gibbons, N. E. gondozásában a The Williams and Williams Company baltimore-i kiadó gondozásában 1974-ben jelent meg). E négyféle speciessze! összehasonlításban a BMG162-aF2 törzs jellemzőit az 1. táblázatban foglaljuk össze. 1. táblázat A BMG162-aF2 törzs összehasonlítása rokon specieszekkel Spóra alak Ea E megkülönböztethetően+ sporangiumot felfúvó domináns pozíció C C Glükózból a következők képzése: sav + (hét) + gáz — — acetoin — — Pálcikák szélesség (pm) 0,6-0,9 0,5-0,8 hossz (pm) 1,2-4 2-5 Gram-reakció + d és v A spóra egyik oldalához+ ( + )b kapcsolódó könnyen festhető test Mozgékonyság d +' Növekedési hőmérséklet (°C) 40-45 35-50 maximum minimum 5-20 15-20 Savképződés: arabinózból és xilózból d — mannitból + + Keményítő hidrolizálása Növekedés: + anaerob agar-agaron — + 7% nátrium-kloridot + — tartalmazó táptalajon Sabouraud-féle destróz—- (±)b tartalmú folyékony táptalajon Sabouraud-féle dextróz— tartalmú agar-agaron Bázikus reakció Voges— . — Proskauer tesztben Indol képzése — d NOj NO%vé redukálása + + Kazein lebontása + + Tirozin lebontása d + Fenil-alanin dezaminálása d — 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 4
