187836. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amino-propil)-amino-bleomicin származékok előállítására
1 187 836 2 jelentése ugyanaz, mint a (VIII), illetve (IX) általános képletekben - átkrístályosítással vagy szilikagélen, illetve adszorbeáló gyantán végzett oszlopkromatográfiával tisztítjuk. A fentebb említett ciklotridekánkarbaldehid is új vegyület, s előállítása a következőként történik. Cinkpór, vízmentes tetrahidrofurán és dibrómmetán keverékéhez titán(IV)-kloridot, majd az így kapott élegyhez ciklotridekanont adunk. így metilén-ciklotridekánhoz jutunk, melyet m-klórperbenzoesav segítségével epoxiddá alakítunk. Tisztítás után ezt az epoxidot bór-trifluorid éteres komplexével vízmentes diklór-metánban reagáltat- 5 juk, s így jutunk a kívánt ciklotridekánkarbaldehidhez. A találmány szerinti jelentősebb (amino-propil)amino-bleomicin-származékok fizikai-kémiai sajátságait mutatja a 2. táblázat. 10 2. Táblázat A vegyület sorszáma A rézmentes A A réztartalmú A rézmentes A vegyület vegyület réztartalmú vegyület -\ 5 vegyület R, elektroforéértéke zise** Rm VRK-n* (alanin Rm = 1,0) A vegyület sorszáma A vegyület vegyület betűjelzése UV betűjelzése UV (lásd 1. abszorpciós (lásd 1. abszorpciós táblázat) maximuma mp(E 1%/1 cm) táblázat) maximuma mp(E 1%/1 cm) 1. MCLPE 291 (87) 0,75 2. MPE 291 (104) 0,81 3. MBZ 291 (106) 0,82 4. MCLBZ (p) 291 (91) 0,77 5. MCLBZ (m) 291 (91) 0,78 6. MCLBZ (0) 291 (91) 0,81 7. MDCLBZ (m, P) 291 (89) 0,72 8. MDCLBZ (0, p) 291(89) ■ 0,75 9. MFBZ (p) 291 (89) 0,82 10. MBRBZ (p) 291 (86) 0,77 11. MPFBZ 291 (91) 0,79 12. MMOBZ (p) 291 (104) 0,83 13. MDMOBZ (0, P) 283 (100) 0,83 14. MCLAPE (p) 291 (88) 0,76 15. MDBZOBZ (m, p) 285 (65) 0,55 16. MPP 291 (102) 0,79 17. MDPE 291 (89) 0,72 18. MCNBZ (p) 291 (95) 0,83 19. > MTFBZ (m) 291 (87) 0,74 20. MNAPH 283 (117) 0,75 21. MANTRA 352 (24) 290 (73) 254 (571) 0,68 22. MCO 291 (86) 0,72 23. MDBZME 291 (88) 0,63 24. MAPE 291 (104) 0,83 1,01 20 25. MFUR 291 (98) 1,08 26. MTHIO 291 (91) 1,09 27. MDBZ 291 (88) 1,09 28. MCP 291 (91) 1,09 29. MCHM 291 (91) 1,09 1,02 30. MCHE 291 (90) 25 31. MCHEP 291 (90) 32. MCU 291 (87) 0,99 33. MNB 291 (96) 34. MDDBZOBZ 285 (86) 1,03 35. MMDBZ 291 (87) 1,06 36. MMCO 291 (90) 1,10 30 37. EEDBZ 291 (90) 1,07 38. BBDBZ 291 (87) 39. MTBZ 291 (83) 0,97 40. ATBZ 291 (87) 1,04 41. PPDBZ 291 (84) 42. PPCO 291 (87) 0,90 35 43. PYDBZ 291 (93) 1,05 44. PYCLBZ 291 (99) 1,07 45. PYCO 291 (99) 1,08 46. EECLPE 291 (82) 0,99 47. MCT 292 (99) 0,98 48. MDDCL 286 (101) 0,85 49. MDDDCL 284 (82) 40 50. MDDMO 280 (93) 1,02 51. MDBZOBZOBZ 282 (84) 1,01 52. MDCOBZ 287 (87) 1,01 53. MDTBZOBZ 294 (61) A A réztartalmú réztartalmú vegyület vegyület R, eleklroforéértéke zise** R„ VRK-n* (alanin R. = 1.0) 0,84 1,06 ' 0,81 1,02 0,65 1,00 0,81 U3 0,78 U1 0,72 1,04 0,74 1,01 0,54 0,99 0,78 1,04 0,12 0,75 0,67 Ö,99 0,71 0,98 0,60 1,03 0,45 0,99 0,55 0,97 0,50 0,96 0,69 1,11 0,52 1,12 0,67 0,95 0,80 1,01 0,74 0,98 0,72 1,11 0,43 1,06 0,04 0,17 0,01 0,02 0,15 0,87 0,08 0,21 0,02 0,51 0,01 0,19 Megjegyzés: * szilanizált® 60F 254 szilikagél (Merck Co.); metanol és 6%-os ammónium-acetát oldat 60 : 40 térf./térf. arányú elegye. ,,VRK” jelentése: vékonyréteg-kromatogramm ** Az elektroforézis körülményei: Avicel SF® (FMC Co.); hangyasav, ecetsav és víz 27 : 75 :900 térf./térf. elegye, 800 V, 15 perc. Az alábbiakban leírjuk néhány találmány szerinti vegyület biológiai sajátságait. (1) A mikrobaellenes hatékonyság vizsgálata Mycobacterium symegmatis ATCC 697 és Bacillus subtilis mikroorganizmusokon A vegyületek hatékonyságát agarlemezes módszerrel mértük e mikroorganizmusokon, feltételezvén, hogy a standardként alkalmazott bleomicin A2 (rézmentes forma) hatékonysága 1000 mcg/mg. (2) HeLa S3 sejtek növekvését gátló hatás vizsgálata HeLa S3 sejteket oltottunk műanyag petricsészékben elhelyezett táptalajra (10% borjúszérumot tartalmazó NEM). Az oltás után 2 nappal a vizsgálandó bleomicinszármazékot a táptalajhoz adtuk, 3 napon át inkubálást végeztünk, s ekkor 50 megszámláltuk a sejteket. A növekvésre gyakorolt gátló hatást százalékban számitottuk, a következő egyenlet segítségével; B —A a növekvést gátló hatás %-ban = 100 x ——— 55 B_C- ahol „A” a sejtek végső száma a vizsgálandó anyag hozzáadása utáni 3. napon, „B” a sejtek végső száma a kontroliban (ehhez nem tettük hozzá a vizsgálandó anyagot), és „C” a sejtek száma a 6C vizsgálandó anyag hozzáadásának időpontjában. Az ID50 értéket (azaz azon koncentrációt, mely 50%-os gátlást okoz), abból a görbéből számítottuk ki, amelyet úgy kaptunk, hogy a gátlás százalékos értékét a vizsgálandó anyag koncentrációjának 65 függvényeként ábrázoltuk. 7
