187835. lajstromszámú szabadalom • Eljárás (amido)-N-helyettesített bleomicinek és savaddiciós sóik előállítására

1

187 835

2

mol/1 koncentrációig való fokozatos növelésével hozunk létre. A körülbelül 0,3 mol/1 nátriumkoncentrációnál lejövő kékszínű frakciókat összegyűjtjük, és Diaion® HP 40 alkalmazásával az előzőekben ismertetett eljárás szerint sómentesítjük, 5 majd liofilizáljuk. 83%-os hozammal 8,5 g réztartalmú dezamido-bleomicin B2-t kapunk kék amorf por formájában.

Ezt a kék por formájú anyag desztillált vízben végezve a vizsgálatot abszorpciós maximumot ad 10 (E 1%/1 cm) 242 mg-nál (138) és 291 mg-nál (115)..

A kálium-bromid-tablettában mért infravörös abszorpciós maximumok 3425, 2975, 2940, 1720,

1640, 1575, 1460, 1420, 1400, 1375, 1280, 1260, 1240, 1190, 1140, 1100, 1060, 1020 és 760 cm“1. Az egjéb fizikokémiai sajátságokat a 6. táblázatban mutatjuk be.

A fentiekhez hasonlóan bleomicin A/-C, 3(/S/l'-fenil-etil)-amino-propil-amino-bleomicin és 3-(3- n-butil-amino-propil-amino)-propil-amino-bleomicin alkalmazása esetén dezamido-bleomicin A/C-t, 3-(/S/-l'-fenil-etil-amino)-propil-amino-dezamido-bleomicint és 3-(3-n-butil-amino-propilamino)-propil-amino-dezamido-bleomicint nyerünk. Ezen vegyületek fizikokémiai sajátságait is a

6. táblázatban mutatjuk be.

6. Táblázat

Szintetizált

dezamido-bleomicin

Réztartalmú forma UV abszorpciós maximuma mg (E 1%/1 cm)

Réztartalmú

forma

vékonyrétegkromatográfiával kapott Rr értéke * 1

Réztartalmú forma * 2 elektroforézissel kapott Rm értéke

(az alanin Rm értéke 1,0)

Dezamido-bleomicin B2

242

(138)

0,95

0,72

292

(115)

0,64*

Dezamido-bleomicin A2'-C

242

(132)

0,75

0,62

292

(138)

0,46*

3-(/S/-l'-fenil-etil-amino)-propil-dezami-242

(147)

0,87

0,67

do-bleomicin

292

(124)

0,40*

3-(3-n-butil-amino-propil-amino)-propil-242

(142)

0,83

1,01

amino-dezamido-bleomicin

292

(118)

0,55*

Megjegyzés:* 1 „Silica Gel 60F 254 Silanised®” (Merck Co.); metanol, 6%-os ammónium-acetát-oldat 60 : 40 térfogatarányú elegyében mérve, kivéve a csillaggal jelölt Rf értékeket, melyeket 65 : 34 térfogatarányú elegyben kaptunk.

* 2Avicel SF® (FMC Co.); hangyasav-ecetsav-víz (27 : 75 : 900 térfogatarányú elegy); 800 V, 15 perc.

B lépés

10 ml dimetil-formamidban (DMF) oldott 1 g, az A lépés szerinti eljárással nyert, réztartalmú dezamido-bleomicinhez és 1,77 g 1-hidroxi-benzotriazolhoz (HOBT) 0 °C-on keverés közben 1,35 g diciklohexil-karbodiimidet (DCC) adunk, mely mennyiség 10 mólekvivalensnyi bleomicinre vonatkoztatva. 5 perc múlva az elegyhez 840 mg 3-(/S/l'-fenil-etil-amino)-propil-amino-hidrogén-kloridot (5 ekvivalensnyi bleomicinre vonatkoztatva) és 0,72 ml N-metil-amorfolint adunk. A kapott elegyet szobahőmérsékleten keverve 16 órán át reagáltatjuk. A reakcióelegyből ezt követően tízszeres 55 térfogatú acetonnal kicsapjuk a kívánt terméket.

A csapadékot alaposan kimossuk acetonnal, majd desztillált vízben feloldjuk és 100 ml térfogatú, nátrium-típus CM-Sephadex® C-25 gyantával (Pharmacia Fine Chemicals Co.) töltött, pH 4,5 -ös 1/20 60 mol/1 ecetsav, nátrium-acetát pufferrel ekvilibrált oszlopra visszük, melyen az anyag adszorbeálódik.

Az adszorbeált fázist lineáris koncentrációgradiens eljárással eluáljuk, a koncentrációgradienst nátrium-kloridnak a fenti pufferhez 1,0 mol/1 koncent- 65

ráció eléréséig való folyamatos adagolásával hozzuk létre. A 0,6 mol/1 nátriumkoncentráció körüli ér'éknél lejövő kék színű frakciókat összegyűjtjük. 45 Az egyesített frakciókat 100 ml Diaion® HP-40 alkalmazásával az előzőekben ismertetett módon sómentesítjük, majd liofilizáljuk. 76%-os hozammal 880 mg réztartalmú amido-N-[3-(/S/-l'-feniletil-amino)-propil]-bleomicin B2-t nyerünk, kék, 50 amorf por formájában. Abszorpciós maximuma (E 1%/1 cm) desztillált vízben 243 mg (125) és 292 mg (96). Infravörös abszorpciós kálium-bromid tablettában 3425, 2975, 2930, 1720, 1640, 1580, 1575, 1550, 1455, 1430, 1400, 1370, 1290, 1240, 1190, 1130, 1095, 1060, 1005, 980, 875 és 760 cm“1. A többi fizikokémiai jellemzőt a 2. táblázatban ismertetjük.

A B lépés szerinti eljárást végezhetjük dimetilfcrmamid helyett dimetil-formamid, víz; dimetilformamid, dimetil-acetamid vagy dimetil-formamid, acetonitril 1 : 1 térfogatarányú elegyében.

Az előzőekben leírtakhoz hasonló módon állítjuk elő a réztartalmú dezamido-bleomicin B2-t és a kívánt terméknek megfelelő amin reakciójával a 2. táblázatban 7-20. sorszám alatt feltüntetett réz-15