187831. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a bestatin gammaformájú kristályainak előállítására
1 187 831 2 A találmány tárgya eljárás a bestatín új, gammaformájú kristályainak előállítására. A találmány szerinti eljárással előállítható, igen stabil gamma-formájú kristályok röntgendiffrakciós spektruma az alábbi táblázattal jellemezhető: d(A) I/Ii 27,59 0,23 13,80 1,00 6,86 0,08 5,57 0,03 5,47 0,03 5,09 0,02 4,79 0,02 4,55 0,28 .4,41 0,03 3,78 0,03 3,43 0,04 Felismertük, hogy a bestatin stabil gammaformájú kristályai állíthatók elő, ha a) bestatin és/vagy valamelyik hidrátja higroszkópos kristályait 148 °C és a bestatin olvadáspontja közötti hőmérsékleten hevítjük, vagy b) bestatin és/vagy valamelyik hidrátja higroszkópos kristályait legalább 20 térfogat% vizet tartalmazó aceton, metil-etil-keton, dietil-keton, tetrahidrofurán, etil-acetát, dioxán és izopropanol, továbbá 6-86 térfogat% vizet tartalmazó metanol oldószerek közül egyben vagy többen szuszpendáljuk vagy ezen oldószerek közül eggyel vagy többel gyúrjuk, legalább 10 percen át. A találmány szerinti eljárással előállított gammaformájú kristályok nem higroszkóposak, nem tartalmaznak kristályvizet és olyan mértékben stabilak, hogy a kristályok nem szenvednek súlycsökkenést, ha nagy páratartalmú környezetben tartjuk vagy melegítjük őket. így ezek a kristályok nagyon könnyen kezelhetők olyan gyógyászati készítmények előállításánál, amelyek hatóanyagként bestatint tartalmaznak. A bestatin, azaz a (2S,3R)-3-amino-2-hidroxi-4- fenil-butanoil-(S)-leucin egy rendkívül kis toxicitású anyag, amelyet Umezawa és munkatársai izoláltak Streptomyces olivoreticuli szűrt tenyészetéből aminopeptidáz-inhibitorként (4 052 449 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás vagy a 7187/1976 számú japán közrebocsátási irat). Ez a vegyület az immunválaszt fokozza, például nyújtott hiperszenzitivitást eredményez és így a szervezet védekező mechanizmusát aktiválja, miáltal karcinosztatikus hatást mutat (117435/1977 számú japán közrebocsátási irat). Érthető tehát, hogy gyógyászati alkalmazásához komoly remények fűződnek. Ami előállítását illeti, ismeretes egy fermentációs eljárás a már említett 4 052 449 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásból, szintetikus eljárásként pedig például a 4 189 604 számú vagy 4 281 180 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban (ezek a 136118/1977, illetve 79353/1980 számú japán közrebocsátási iratoknak felelnek meg) ismertetett eljárás. A már említett 4 281 180 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírás 19. példájában a bestatin-tartalmú gyógyászati készítmények előállítására ismertetett eljárás - amely meggyőződésünk szerint ipari szempontból igen előnyös eljárás - vizsgálata során megállapítottuk, hogy a bestatin kezelése igen nehéz, mert az anyag higroszkópos. Tanulmányoztuk a bestatin higroszkóposságának okait és megállapítottuk, hogy ennek oka az, hogy a bestatin higroszkópos kristályforma, mégpedig a továbbiakban béta-formájúnak nevezett kristály alakjában van jelen,és hogy ez a béta-formájú kristály levegőn állva nem-higroszkópos dihidrát kristállyá (amelyet a továbbiakban alfa-formájú kristályként fogunk említeni) alakul át víz abszorpciója útján, és hogy mind a béta-, mind az alfa-formájú kristály a korábbiakban meghatározott oldószerekben vagy oldószerelegyekben szuszpendálva vagy ezekkel összegyúrva vízmentes, nem higroszkópos, nagy mértékben stabil kristállyá, azaz a találmány szerinti gamma-formájú kristállyá alakítható át. Áttérve a bejelentéshez tartozó ábrák ismertetésére, az 1. ábrán a találmány szerinti eljárással előállítható gamma-formájú kristály röntgendiffrakciós görbéje, míg a 2. ábrán ugyanennek a kristálynak a differenciál termogramja (rövidítve: DTA-görbéje) látható. A találmány szerinti eljárással előállított gammaformájú kristály fiziko-kémiai jellemzői a következők. 1. Röntgendiffrakciós vizsgálati eredmények Az 1. táblázat és az 1. ábra azoknak a röntgendiffrakciós vizsgálatoknak az eredményeit adja meg, amelyeket „Rikagaku-denki” típusú, nikkelfólia szűrővel felszerelt Cu-sugárzóberendezéssel és szcintillációs számlálóval ellátott, 30 KV feszültségen 20 mA áramerősséggel működtetett, X = 1,5405 hullámhosszúságú fényt kibocsátó röntgendiffraktométerrel kaptunk. 1. táblázat d(Á) I/I* d(A) I/I. 27,59 0,23 4,79 0,02 13,80 1,00 4,55 0,28 6,86 0,08 4,41 0,03 5,57 0,03 3,78 0,03 5,47 0,03 3,43 0,04 5,09 0,02 2. Termikus analízis „Shimadzu DT-Model 30” típusú termoelemző berendezés alkalmazásával végrehajtott differenciális termoanalízis során nem figyelhető meg exoterm vagy endoterm reakció körülbelül 233 °C-ig, amely hőmérsékleten a bestatin megolvad és bomlik. Továbbá termogravimetriás vizsgálatban nem figyelhető meg súly változás a bomlásig. Ugyanakkor termogravimetriás elemzés során az alfaformájú kristály 48 °C körül elkezd súlyveszteséget mutatni és súlyának mintegy 9-10 súly%-át veszti el. 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 2
