187808. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-(karboxi-alkil)-prolin tartalmő tripeptidek előállítására
1 187.808 2 va 4,3 g sárga színű szirupos anyagot kapunk. Ezt azután szilikagél oszlopra felvisszük, majd az oszlopot metilén-kloriddal, 1 térfogat% metanolt tartalmazó metilén-kloriddal és 1,5 térfogat% metanolt tartalmazó metilén-kloriddal eluáljuk. így 2.1 g (47%) mennyiségben N-(metoxi-karbomlmetil)-L-propil-L-alanil-prolin-benzilésztert kapunk, amely az előállítani kívánt tripeptiddé képes lebomlani a szervezetben. 5,0 g bárium-hidroxid-hidrát 40 ml vízzel készült elegyéhez hozzáadjuk az előző bekezdés szerinti 2.1 g köztitermék 30 ml metanollal készült oldatát, majd a kapott reakcióelegyet 4 órán át keverjük. Ezt követően a bárium-karbonát kicsapása céljából a reakcióelegyen 4 órán át szén-dioxid gázt vezetünk át. A szűréssel nyert színtelen szűrletet bepárolva 1,25 g (78%) mennyiségben az előállítani kívánt tripeptidet kapjuk fehér csapadék formájában. Egy 300 mg-os mintát metanol és etil-acetát elegyéből átkristályosítunk, 270 °C (bomlik) olvadáspontú fehér csapadékot kapva, ami a báriumsó. A nem tisztított 0,9 g csapadékot vízben oldjuk, majd a vizes oldatot szűrjük. A szűrlet pH-értékét híg kénsavval 3,5-re beállítjuk. A kivált báriumszulfátot kiszűrjük. A szürletet bepárolva a 190-196°C olvadáspontú (bomlik) N-(karboximetil)-L-prolil-L-alanil-L-prolin-szuífátot kapjuk. Elemzési eredmények a Cj 5H2jN3Oö • V* H2- S04 • Vi H20 képlet alapján; számított: C% = 48,06, H% = 6,59, N% = 11,20; talált: C% - 48,48, H% = 6,69, N% = 10,80, C% = 48,21, H% = 6,78, N% = 10,74. [a]“ ~ - 132,2* (c= 1, metanol és víz 1 : 1 arányú elegye). Három érzéstelenített kutyán végrehajtott renális értágító hatástesztben a báriumsó a renális véráram 21,7%-os növekedését és renális vaszkuláris ellenállás 15%-os csökkenését eredményezi percenkénti 30 pg/kg dózisban beadva. 2. példa 6,0 g (0,025 mól) L-prolin-benzilészter-hidroklorid, 6,75 g (0,05 mól) 1-hidroxi-benztriazol, 3,2 ml (0,025 mól) N-etil-morfolin, 6,63 g (0,025 mól) L-(terc-butoxi-karbonil)-fenil-alanin, 5,15 g (0,025 mól) diciklohexil-karbodiimid és 35 ml vízmentes tetrahidrofurán elegyét 0 ‘C-on rövid időn át, majd 25 *C-on 4 órán át keveijük. Az anyalúgot ezután elválasztjuk, majd bepároljuk. A maradékot etil-acetát és híg sósavoldat elegyében feloldjuk, majd a fázisokat elválasztjuk egymástól, és a vizes fázist etil-acetáttal mossuk. Az egyesített szerves fázist híg sósavoldattal, vízzel, 5%-os nátriumhidrogén-karbonát-oldattal és telített nátriumkloríd-oldattal mossuk, szárítjuk és bepároljuk, 10,3 g (91%) mennyiségben N-(terc-butoxi-karbonil)-L-fenil-alanil-L-prolin-benzilésztert kapva. Ezt az anyagot (7,0 g) azután 10 ml trifluor-ecetsavból, 40 ml vízmentes metilén-kloridból és 4 ml 1,3-dimetoxi-benzolbó! álló oldattal 25*C-on 2 órán át reagáltatjuk, majd a reakcióelegyet a korábbiakban ismertetett módon feldolgozzuk. így 5,57 g mennyiségben L-fenil-alanil-L-proljn-benzilészter-hidrokloridot kapunk. Az utóbbi vegyületből azután 2,23 g-ot (0,01 mól) 3,89 g N-(metoxi-karbonil-metil)-L- prolin-hidrokloriddal, 2,7 g (0,02 mól) 1-hidroxibenztriazollal, 4,0 ml N-etil-morfolinnal, 2,06 g (0,01 mól) diciklohexii-karbodiimiddcl és 40 ml vízmentes tetrahidrofuránnal reagáltatunk 25 *C- on 17 órán át a korábbiakban ismertetett módon, 2,9 g mennyiségben szilikagélbŐl álló oszlopon tisztított N-(metoxi-karbonil-metil)-L-prolin-benzilésztert kapva. Ezt az előállítani kívánt tripeptiddé a szervezetben lebomlani képes diésztert (1,1 g, 2,1 millimól) azután feloldjuk 30 ml metanolban, majd 5,0 g bárium-hidroxid 40 ml vízzel készült, meleg oldatával reagáltatjuk úgy, hogy a kapott reakcióelegyet 25 °C-on 4 órán át keverjük. Ezután a reakcióelegyhez fölöslegben vett szén-dioxidot adunk, majd a kivált bárium-karbonátot kiszűrjük, a szűréshez szűrési segédanyagot használva. A kapott szűrletet bepároljuk, majd a maradékot etanollal azeotróp desztillálásnak vetjük alá. így 0,72 g (82%) L-propil-L-fenil-alanil-L-prolin-hemibáriumsó-monohidrátot, majd 0,89 g 145-148 °C olvadáspontú N(karboxi-metil)-L-propil-L-fenil-alanil-L-prolinhemi szulfátsót kapunk. Elemzési eredmények a C2,H25N306 • V^Ba • H20 képlet alapján: számított: C% = 51,15, H% - 5,31, N% = 8,52, Ba% = 13,92; talált: C% = 51,47, H% = 5,27, N% = 5,28, Ba% = 12,60 C% = 51,64, H% = 5,50, N% = 5,28, Ba% = 12,60. KD5 = -43,9 *C(c=1, víz). Elemzési eredmények a C21H27N30,5 • V4 H2S04 képlet alapján: számított: C% « 54,07, H% = 6,04, N% = 9,01; talált: C% = 53,71, H% = 5,90, N% = 8,82, C% = 53,64, H% = 5,94, N% = 8,91. Az említett hemiszulfátsó a renális véráramot 30%-kal növeli percenkénti 300 pg/kg dózisban beadva. A báriumsó nem mutat hatást a vizsgálati körülmények között. 3. példa Az előző példákban ismertetett módon, az acilezéshez diciklohexil-karbodiimidet használva 7,6 g N-(terc-butoxi-karbonil)-ß-alanil-L-prolin-benzilésztert állítunk elő, majd a védőcsoportot trifluorecetsavat használva eltávolítjuk, ß-alanil-L-prolinbenzilészter-hidrokloridot kapva. Ebből a vegyü-5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 5
