187763. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új poliéter-vegyületek előállítására
21 187 763 22 A pH-t autoklávozás előtt 6,4-re állítjuk be. A beoltott táptalajt 28 °C-on 5 napon ál inkubáljuk percenkénti 250 fordulatszámú forgó rázatóberendezésen. A fermentlében lévő X-14868A antibiotikum aktivitását Staphylococcus aureus ATCC 6538P törzzsel szemben az. agar-ditfúziós lemezes módszerrel határozzuk meg. 2. példa Az X-14868A antibiotikum nátrium-sójának és az X-14868B antibiotikum nátrium-sójának izolálása a rázatott lombikos fermentációnál nyert fermcntléből. A. lépés 50 db fél-literes Erlcnmeyer lombikban végrehajtott fermentációnál nyert teljes fermentlevet (kiindulási táptalaj 100- 100 ml) 5 napos fermentáció után összegyűjtjük (5 liter) és fele térfogatú etilacetáttal kétszer extraháljuk. Az oldószeres réteget másfélórás keverés után elválasztjuk és vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat (4 g) dietiléterben oldjuk és 200 g, díetiléterben szuszpendált szílíkagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot növekvő acetontartalmú dietiléter-aceton elegyekkel (az eluálást 2 liter dietiléterrel kezdjük és 2 liter 9 : 1 arányú dietiléter-aceton eleggyel fejezzük be), majd 2 liter 1 : 1 arányú dietiléter-aceton eleggyel és utána 2 liter 7 : 3 arányú metilénklorid-etanol eleggyel cluáljuk. 40 mles frakciókat gyűjtünk össze, a 18-75. sz, frakciót egyesítjük, az oldószert vákuumban ledesztilláljuk és a maradékot (1,66 g) etilacetátban oldjuk és előbb azonos térfogatú 1 n sósavval kétszer, majd azonos térfogatú, szobahőmérsékleten telített nátriumkarbonát-oldatta! kétszer mossuk. Az oldószeres fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk és az X-14868A antibiotikum nátrium-sóját kristályos n-hexán hozzáadásával kicsapjuk Etilacetát és n-hexán elegyéből történő áikrislályositás után az X-14868A antibiotikum nátrium-sójának analitikai tisztaságú mintáját kapjuk. Op.: 193-194 °C. B. lépés A 161 — 215 sz. frakcióból az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot etilacetátban oldjuk és előbb I n sósavval, majd szobahőmérséleten telített nátrium-karbonát-oidattal mossuk és nátrium-szulfát felett szárítjuk. Az X-I4868B antibiotikum kristályos nátrium sóját n-hexán hozzáadásával csapjuk ki. Op.: 172,5- 174 °C. 3. példa Nocardia X-14868 törzzsel végrehajtott tank fermentáció Az X-14868A antibiotikumot tartalmazó, Nocardia X-14868 törzs tenyészetét alábbi összetételű, ferde keményítő-kazein agaron tenyésztjük és tartjuk fenn. Komponens g/1 desztillált víz Oldható keményítő !(),() Kazein 1,0 Dikálium-hidrogén-foszfát 0,5 Vízmentes magnézium-szulfát 0,5 Agár 20,0 A pH-t autoklávozás előtt nátrium-hidroxiddal 7,4 értékre állátjuk be. A ferde táptalajt Nocardia X-14868 tenyészettel inokuláljuk és 28 °C-on 7-14 napon át inkubáljuk. A jólfejlett ferde agar tenyészet egy részével 500 ml-es Erlenmeyer-Iombikban levő 100 ml, alábbi összetételü táptalajt beoltva vegetatív inokulumol készítünk: Komponens g/1 desztillált víz Paradicsomvelő 5,0 Oldható desztillációs 5,0 maradék Pepton 5,0 Keserüanyagok tói 5,0 mentesített szárított élesztő Kukoricakeményítő 20,0 Kalcium-karbonát 1,0 Dikálium-hidrogén-foszfát 1,0 A pH-t autoklávozás előtt 7,0 értékre állítjuk be. Az inokulált táptalajt percenkénti 250 fordulatszámú forgó rázatógépen 28 ”C-on 72 órán át inkubáljuk. A kapott tenyészet 60 mles részletével (3 tf/tf %) 6 literes Erlenmeyer-lombikbanlcvő 2 liter, alábbi őszszetételű inokulum táptalajt oltunk be: Komponens g/1 desztillált víz Paradicsomvelő 5,0 Oldható desztillációs 5,0 maradékok Keserűanyagoktól 5,0 mentesített szárított élesztő Pepton 5,0 Kukoricakeményítő 20,0 Kalcium-karbonát 1,0 Dikálium-hidrogén-foszfát 1,0 ApH-t az autoklávozás előtt 7,0 értékre állítjuk be. A beoltott táptalajt 72 órán át 28 °C-on percenkénti 250 fordulatszámú forgó rázatógépen inkubáljuk. A kapott tenyészet 4 literes részletével 380 literes fermentorban levő 230 liter, alábbi összetételű termelő táptalajt oltunk be: 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 12
