187763. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új poliéter-vegyületek előállítására
23 187 763 24 Komponens g/l csapvíz Glicerin 40,0 Pepton 5,0 Ccrelóz 2,0 Burgonyakeményítő 2,0 Zsírtalanított szójadara 5,0 Keserűanyagok tói 5,0 mentesített szárított élesztő Nátrium-klorid 5,0 Kalcium-karbonát 0,2 Habásgátló 0,l A táptalaj pH-ját 6,4 értékre állítjuk be, mad 4,2 kg/cm2 nyomású gőzzel 75 percen át sterilezzük. Az inokulált táptalajt 90 liter/perc sebességű levegőztetés és percenkénti 280 fordulatszámú keverés mellett keverjük. A fermentációt 28 “C-on 5 napon át végezzük. A fermentlében levő X-14868A antibiotikum aktivitását Staphylococcus aureus ATCC 653P törzzsel szemben az agar-diffúziós lemezes módszerrel határozzuk meg. 4. példa Az X-14868A, X-14868C és X-14868D antibiotikumok nátrium-sóinak izolálása Nocardia X-14868 törzzsel végrehajtott tank-fermentáció során kapott termentléből. A. lépés A 3. példában végrehajtott 230 literes fermentációnál nyert teljes fermentlevet 115 órás fermentáció után azonos térfogatú etilaceáthoz adjuk. Az elegyet egy órán át keverjük, az oldószeres réteget elválasztjuk és vákuumban 4,2 literre pároljuk be. A betöményített oldószeres fázist azonos térfogatú 1 n sósavval kétszer, majd szobahőmérsékleten telített azonos térfogatú nátrium-karbonát-oldattal kétszer mossuk. Az oldószeres fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk és vákuumban bepároljuk. A visszamaradó olajat nhexánban oldjuk és acetonitrollel egyszer, majd 8 : 2 arányú acetonitril-metanol eleggyel kétszer extraháljuk. Az acetonitrillel és 8 : 2 arányú acetonitrol-metanof eleggyel nyert extraktumot összegyűjtjük és az oldószert vákuumban eltávolítjuk. A visszamaradó olajat dietiléterben oldjuk, aktivszénnel kezeljük, szűrjük és n-hexán hozzáadásával az X-14868A antibiotikum nyers nátrium-sójának kristályait lecsapjuk. A kapott nyers antibiotikum-kristályokat metilénkloridban oldjuk és 600 g, metilénkloridban szuszpendált szilikagéllel töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 4 liter 8 : 2 :0,02 arányú dietiléter-aceton-ammóniumhidroxid eleggyel eluáijuk. 45 ml-es frakciókat gyűjtünk össze és a 13—i5. sz. frakciót egyesítjük. Az oldószert vákuumban ledesztilláljuk, a maradékot etilacetátban oldjuk és egymásután 1 n sósavval kétszer és szobahőmérsékleten telített nátrium-karbonát-oldattal kétszer mossuk. A szerves fázist nátrium-szulfát felett szárítjuk, majd bcpároljuk. A visszamaradó olajat mctilén-kloridban oldjuk és n-hexán hozzáadásával az X-14868A antibiotikum kristályos nátrium-sóját kicsapjuk. Op. : 193- 195 °C. B. lépés Az X-I4868A antibiotikum nyers nátrium-sójának előállításánál kapott anyalúgot (A. lépés) I kg szilikagél metilén-kloridos szuszpenzióját tartalmazó oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 1 liter n-hexánnal, majd 4 liter 7 : 3 arányú dietiléter-n-hexán elegytő! 4 liter 8 : 2 arányú dietilélcr-accton clegyig növekvő gradiens szerint eluáijuk. 40 ml-cs frakciókat gyűjtünk össze és a 43-80. sz. frakciót egyesítjük. Az oldószert vákuumban eltávolítjuk, a maradékot etilacetátban oldjuk, majd előbb 1 n sósavval és utána szobahőmérsékleten telített vizes nátrium-karbonát oldattal mossuk, és aktív szénnel kezeljük. Szűrés után az etilacetátos fázist bepároljuk. A visszamaradó olajat dietiléterben oldjuk és n-hexán hozzáadásával további X-14868A antibiotikum nátriumsót csapunk ki. Op.: 193- 195 ”C. C. lépés Az A. lépés szerint szilikagélcn végrehajtott kromatografálásnál nyert 22 — 40. frakciók feldolgozása után az X-14868C antibiotikum kristályos nátriumsóját kapjuk. Op.: 172- 175 °C. D. lépés Az X-14868A antibiotikum kristályos nátriumsójának előállításánál kapott anyalúgot (B. lépés) és a szilikagéles kromatografálásnál nyert 16-21. frakciót (A. lépés) egyesítjük, bepároljuk és 600 g szilikagél metilén-kloridos szuszpcnziójával töltött oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 4 liter 1 : 1 arányú dietiléter-hexárs eleggyel, 4 liter 6 : 2 : 2 : 0,002 arányú dietiléter(aceton/n-hexán) ammónium-hidroxid eleggyel és 2 liter 8 : 2 arányú dietiléter-aceton elegygyel eiuáljuk. 40 ml-es frakciókat gyűjtünk össze. A 71—98. frakciót összegyűjtjük és kristályosítjuk. További mennyiségű kristályos X-14868A antibiotikum nátriumsót kapunk. A 141 — 172. frakciót is egyesítjük, az oldószert vákuumban ledcsztilláljuk és a maradékot dietiléter és n-hexán elegyéből kristályosítjuk. Az X-14868D antibiotikum nátrium-sóját kapjuk. Op.: 194-195 °C. 5. példa Az X-14868A antibiotikum tallium sójának előállítása 51 mg X-14868A antibiotikum-nátrium-só metilénkloridos oldatát I n sósavval, vízzel, majd vizes tallium-karbonát oldattal négyszer mossuk. Az oldószert ledesztilláljuk. Az oldatot kis térfogatra bcpároljuk cs n-hexán hozzáadásával az X-14868A antibiotikum 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 13
