187421. lajstromszámú szabadalom • Eljárás az Aujeszky-féle betegség elleni inaktivált, adjuvált oltóanyag előállítására
1 2 , 187 42 T A találmány tárgya eljárás az Aujeszky-féle betegség elleni inaktivált, adjuvált oltóanyag előállítására. A háziállatok régóta ismert, súlyos gazdasági veszteséget okozó betegsége az Aujeszky-féle betegség, amely nevét első leírójáról, a magyar Aujeszkv Aladártól kapta (Zbl. Bakt. Őrig. 1903 I, 32, 353-357). A betegség elsősorban a sertésállomá nyokban, a fiatal malacoknál okoz nagy veszteségeket. Az életkor előrehaladtával az Aujeszky-féle 10- betegség okozta malacelhullás aránya csökken, de a légzőszervi megbetegedés, az idegrendszeri bán talmak, és a szövődmények az állattartás gazdasá gosságát erősen lerontják. A vírussal fertőzött álla tok a kórokozót hosszabb ideig (1-2 évig) hordoz 15 hatják, és stressz hatások - mint például az ellés - után vírusürítés révén a betegséget terjeszthetik (J. Am. Vet. Med. Áss. 176, 1980, 998-1000, 1345-1347). A fertőzött kocák magzataikat gyakran elvetélik (Acta Vet. Acad. Sei. Hung, 12, 1962, 20 17-23). A fertőzött sertések nagy szerepet játszanak a kérődző állatok (szarvasmarha, juh) Aujészky-féle betegségének terjesztésében is (Acta. Vet Acad. Sei. Hung. 12,1962,53-58, J. Am. Vet. Med Ass. 176, 1980, 1001-1003). A fertőzött kocák a tej 25 útján a vírust és a kolosztrális ellenanyagot egyaránt üríthetik (Acta. Vet. Acad. Sei. Hung. 7, 1957, 273-276, Acta. Vet. Sei. Hung. 13, 1963, 111-118). Az Aujeszky-betegség elleni védekezési eljárások alapvetően arra irányulnak, hogy a beteg 30 ség iránt legfogékonyabb szopós malacokat életük első heteiben specifikus ellenyagokkal megvédjék. Hazánkban a betegség elleni védekezés céljából első lépésként a szopós malacok preventív kezelését célzó hiperimmun szérum termelési technológiáját 35 dolgozták ki (Acta. Vet. Acad. Sei. Hung., 7, 1957, 423-427). A sertésekből termelt hiperimmun szérum kellő időben alkalmazva a veszteségeket csökkenti, azonban hátrányai jelentősek: a szérum előállítása nagyon költséges, és a szérum gyorsan 40 (10-14 nap alatt) kiürül a szervezetből. A szérum* magas költsége miatt alkalmazása nem kerülhet szóba a süldőknél és a felnőtt állatok esetében. Az Aujeszky-betegség elleni védekezés következő lépése a betegség elleni aktív immunizálási eljárás 45 bevezetésé volt, amelynek során különböző módon és mértékben gyengített vírustörzseket állítottak elő vakcinagyártás céljára. Hazánkban 1961 óta van forgalomban csökkentett virulenciájú élővirus vakcina, amelyet sertések, kérődzők és az ebek 50 aktív immunizálására használnak (MÁL. 16 1961, 42-45). A betegség gazdasági kártétele a széleskörű vakcinázási program bevezetése óta csökkent hazánkban, (Cah. Med. Vet. 43, 1974,240-247) azonban az élővírus vakcina alkalmazásának v^n né- 55 hány hátránya: 1. Vemhes kocák immunizálása után a kolosztrum és a. tej ellenanyagtartalma egyedenként változó ideig, 4-6 hétig a malacoknak passzív immunitást biztosít. Ezidő alatt az élővírus vakcinával go eredményesen immunizálni nem lehet, mert a kiürülőfélben lévő kolosztrális ellenanyagok alacsony szintje is képes megakadályozni a vakcinavírusnak az aktív immunitás kialakulásához szükséges mértékű elszaporodását. 2. A fenti okok miatt lehetnek az állományban olyan állatok, amelyeknél a vakcinázás eredménytelen volt, és fertőzött állományban ezek a hiányos immunállapotú egyedek biztosítják a virulens vírus 5 fennmaradását. 3. Az élő vakcinák alkalmazását néhány országban hatóságilag tiltják, és egyes esetekben ezt a tilalmat kiterjesztik az élő vakcinával immunizált állatokból származó húsra is, így a hazai húsexport lehetőségei beszűkülnek. 4. Bár a hazai attenuált vakcina ezideig ártalmatlannak és genetikailag stabilnak bizonyult, külföldi megfigyelések beszámolnak egyes esetekben a különböző attenuált vakcina vírustörzsek virulenciájának váratlan fokozódásáról (The Vet. Bull. 43, 1973, 465-480, Dtsch. Tierarzt. Wschr., 85, 1987, 381-420), amely a vakcinával oltott állatok súlyos oltási reakciójában nyilvánul meg. 5. A hazai attenuált vakcina ebek és nyércek számára nem teljesen ártalmatlan, macskát nem ' immunizál. Az élő vakcinával kapcsolatos problémák miatt már korábban próbálkoztak inaktivált vakcina előállításával, formaiint, UV-sugárzást, hőt, bétapropiolaktont, szaponínt, kristályibolyát, etanolt használva inaktiválásra, alumínium hidroxid-gélt adjuválásra (Acta Microbiol. Hung. 2 151-160 1954, Arch. exp. Vet. Med. 17 595-613, 1963, Arch. Vet. 5 107-14, 1968 Arch. Exp. Vet. Med. 21 501-507 1967). Az inaktiválási eljárások és az adjuválás módja azonban nem eredményezett kellő hatékonyságú vakcinát. A vírus nukleinsavára ható alkilező inaktiváló ágensek alkalmazásával etiletiléniminnel inaktivált, DEAE dextránnal adjuvált vakcina előállításáról számoltak be kutatók (Zbl. Vet. Med, B, 20, 127-138, 1973). A DEAE-dextrán adjuválás azonban allergiás reakciókat váltott ki. A fentieket figyelembe véve a találmány célja tehát az Aujeszky-féle betegség ellen egy olyan inaktivált vakcina előállítása, amely 1. hatékonyság tekintetében az élő attenuált Aujeszky vakcinával azonos vagy jobb eredményt ad, 2. bármely korú és fajú, a betegség iránt fogékony állat számára ártalmatlan, és megfelelő szintű aktív immunitás létesítésére alkalmas, 3. kolosztrális immunitással rendelkező malacok aktív immunizálására is felhasználható. Ezt a feladatot olyan eljárással oldottuk meg, amelynek során- az Országos Közegészségügyi Intézetnél 00 236 sz. alatt letétbe helyezett virulens vírustörzzsel nyulakat fertőzünk meg, az elpusztult állatpk agyából szuszpenziót készítünk, a nyúlagyszuszpenzió 1-3. szövetpaszázsával-.előkeltetett SPF tyúkembrióból tripszines emésztéssel előállított primer egyrétegű, vagy fiatal borjak heréjéből tripszines emésztéssel kézült primer egyrétegű, vagy BHK sejtvonal felhasználásával készült egyrétegű, szuszpenziós vagy mikrohordozós kultúrát fertőzünk, a kultúrát 37 °C-on a teljes sejtkárosító hatás megjelenéséig inkubáljuk,- majd a learatott vírusszuszpenziót felhasználás előtt brómetilaminból ciklizált etilén-iminnel inak-2
