187416. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kimotripszin vagy tripszin aktivitásának székletben történő meghatározására
1 187416 2 Detergens Minta sorszáma nélkül (4. Példa) mE/perc Detergenssel (3. példa) mE/perc 1. 31 181 2. 8 68 3. 6 42 4. 8 68 5. 20 159 5 10 3-Karbometoxi-propionil-L-arginil-L-prolil-L-tirozin-p-nitro-anilid-hidroklorid Nátrium-klorid Kalcium-klorid Trisz/HCL-puffer, pH = 9,0 c) Homogenizálás, d) Mérés: Mind a minta homogenizálását mind az aktivitás mérését az 1. Példa szerint végezzük. 0,5 nr.nól, I 250,0 mmól 1 20.0 mmól I 60.0 mmól/1 5. Példa a) Homogenizáló oldat előállítása: A homogenizáló oldatot az 1. Példában leírtak szerint készítjük. b) Reagensoldat előállítása: Az alábbiakban felsorolt anyagokból vizes oldatot készítünk: Ala-Ala-Phe-p-nitro-anilid 2 mmól/1 Nátrium-klorid 250 mmól/1 Kalcium-klorid 20 mmól/1 Trisz/HCL-puffer, Ph = 9,0 . 60 mmól/1 c.) A vizsgálandó minta homogenizálása: 200 mg székletmintából és 10 ml homogenizáló oldatból alkalmas berendezésben finom szuszpenziót készítünk. d) A mérés kivitelezése: 1 cm-es küvettába belepipettázunk 1 ml reagensoldatot, majd a hőmérsékletet 25 *C-ra beállítjuk és ezen az értéken tartjuk, majd homogenizált mintából hozzáadunk 200 pf-t. Rövid ideig tartó összekeverés után az extinció növekedését 405 nm-nél mér-15 20 25 30 jük. 35 6. Példa (összehasonlításra szolgáló példa) 40 A 6. Példa mindenben az 5. Példának felel meg, az egyetlen eltérés, hogy a homogenizáló oldat nem tartalmaz detergenst. Azonos mintából kiindulva az 5. Példa szerinti és a 6. Példa szerinti eljárással az alábbi mérési eredményeket kapjuk: 5 Detergens nélkül (6. Példa) mE/perc 31 Detergenssel (5. Példa) mE/perc 50 45 a) Homogenizáló oldat előállítása: A homogenizáló oldatot az 1. Példában leírtak szerint készítjük. b) Reagensoldat előállítása: Vizes oldatot készítünk az alábbiakban felsorolt go anyagokból: 8. Példa- (Összehasonlításra szolgáló példa) A 8. Példa mindenben a 7. Példának felel meg. azzal az egyetlen eltéréssel, hogy a homogenizáló oldat nem tartalmaz detergenst. Azonos mintából kiindulva a 7. és a 8. Példa szerinti eljárással az alábbi mérési eredményeket kapjuk: Detergens nélkül Detergenssel (8. Példa) (7. Példa) mE/perc mE/perc 19 . 148 ' 9. Példa Tripszin meghatározása a) Homogenizáló oldat előállítása: A homogenizáló oldatot az 1. Példában leírtak szerint készítjük. b) Reagensoldat előállítása: Az alábbiakban felsorolt anyagokból vizes oldatot készítünk: Karbobenzoxi-L-valil-L-glicil-L-arginin-p-nitro-anilid-acetát > 5 mmól/1 Nátrium-klorid 250 mmól/1 Kalcium-klorid 20 mmól/1 Trisz/HCL-puffer, pH = 9,0 60 mmól/1 c) Homogenizálás, d) Mérés: Mind a minta homogenizálását, mind az enzimaktivitás mérését az 1. Példa szerint végezzük. 10. Példa (összehasonlításra szolgáló példa) A 10. Példa mindenben a 9. Példának felel meg. azzal az egyetlen eltéréssel, hogy a homogenizáló oldat nem tartalmaz detergenst. Azonos mintából kiindulva a 9. és a 10. Példa szerinti eljárás az alábbi mérési eredményeket adja: Detergens nélkül Detergenssel (10. Példa) (9. Példa) mE/perc mE/perc kb. 3 8 65
