187416. lajstromszámú szabadalom • Eljárás kimotripszin vagy tripszin aktivitásának székletben történő meghatározására
1 187 416 2 11. Példa 10 15 Egy székletmintából alikvot részt veszünk és azt egy alkalmas szerkezet segítségével olyan térbe adagoljuk be, melynek egyik oldalát szűrőpapír vagy valamilyen ehhez hasonló anyag határolja. Erre a célra például a vérnek székletmintában történő meghatározására alkalmas eszközök felelnek meg, igy a Hemo FEC® (Boehringer Mannheim gyártmánya) vagy a Feca-Nostic® (Gödecke AG gyártmánya) amennyiben a szűrőpapírt a megfelelőre kicseréljük. A szűrőpapírra 50 pl vizes szolubilizáció oldatot cseppentünk, melynek összetétele az alábbi: Lauril-trimetil-ammónium-klorid 50 g/1 (5%) Nátrium-klorid 500 mmól/1 KalciUm-klorid 100 mmól/1 Ezáltal a határfelületeken levő kimotripszin szolubilizálódik és így azt a szűrőpapír felveszi. Ezt 20 követően a szűrőpapírra 50 pl alábbi összetételű reagensoldatot cseppentünk: Succ-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA 2 mmól/1 N-a-Naftil-etilén-diamin 5 g/1 Nátrium-nitrit 1 g/1 „ Trisz/HCL-puffer, pH = 9,0 100 mmól/1 Ä 5 perc reakcióidő eltelte után a papírra 1 csepp (3,2 mmól/1) triklór-ecetsavat cseppentünk, amikor is intenzív ibolya elszíneződés lép fél, ha a vizsgálandó mintában kimotripszin volt jelen. Az elszíneződés mértéke függ az enzim mennyiségétől. 30 12. Példa (Összehasonlításra szolgáló példa) 35 All. példa szerinti műveleteket megismételjük azzal az egyetlen eltéréssel, hogy az enzim szolubilizálására használt oldat nem tartalmaz detergenst. Ilyen körülmények között nem lép fel észrevehető elszíneződés. 4 “ Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a székletben levő kimotripszin vagy 45 tripszin aktivitásának meghatározására a széklet vizes vagy vizes-szerves közegben levő szuszpenziójának egy alkalmas szubsztrátumra gyakorolt hatása folytán bekövetkező hasadás sebességének mérése útján, azzal jellemezve, hogy a székletet valamilyen felületaktív anyag - és kívánt esetben vízoldható só - jelenlétében szuszpendáljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy felületaktív anyagként egy kationos vagy egy nem ionos tenzidet alkalmazunk. 3. A 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy felületaktív anyagként egy kvatemer ammóniumsót vagy egy alkil-piridiniumsót, különösen lauril-trimetil-ammónium-kloridot használunk. 4. Az 1-3. igénypont bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a széklet szuszpendálására olyan homogenizáló oldatot használunk, amely a felületaktív anyagot 0,02-10 súly%-nak, előnyösen 0,5-5 súly%-nak megfelelő koncentrációban tartalmazza. 5. Az 1-4. igénypont bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a széklet szuszpendálására olyan homogenizáló oldatot használunk, amely a felületaktív anyag mellett még egy vagy több vizoldható sót is tartalmaz. ’ 6. Az 5. igénypont szerinti eljárás; azzal jellemezve, hogy valamilyen nátriumsót és/vagy valamilyen kalciumsót tartalmazó homogenizáló oldatot használunk. 7. Az 5. vagy a 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan homogenizáló oldatot használunk, melyben az ionerősség értéke 20rl000 mval/1. 8. Reagens az 1-7. igénypont bármelyike szerinti meghatározáshoz, azzal jellemezve, hogy a reagensoldat 0,02-10 súly% felületaktív anyagot, 0,05-5 mmól/1 enzimszubsztrátumot, 20-1000 mval/1 vízoldható sót és 10-1000 mmól/17-11 pH-jú pufferoldatot tartalmaz. 9. A 8. igénypont szerinti reagens kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy a reagensoldat 0,05-5 súly% felületaktív anyagot, 0,2-2 mmól/1 szubsztrátumot, 100-1000 mmól/1 nátrium-kloridot és/vagy 20-500 mmól/1 kalcium-kloridot és 50-200 mmól/1 8-10 pH-jú trisz-puffert tartalmaz. Ábra nélkül Kiadja az Országos Találmányi Hivalal A kiadásért felel: Himer Zoltán'osztályvezető Szedte a Nyomdaipari Fényszedő Üzem (877654/09) 87—2221 Dabasi Nyomda, Budapest—Dabas Felelős vezető: Bálint Csaba igazgató 6
