187390. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-oxo-delta1,4-szteroid-származékok előállítására
1 .187 390 2 sékleten levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 24 órán át inkubáljuk. A tápközeg összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. c) 7,5 g llß,21-dihidroxi-17a-izopropoxi-metoxi-4-pregnen-3,20-diont feloldunk 200 ml etilénglikol-monometil-éterben, majd az oldatot sterilre •szüljük. d) 7,5 g kobalt(II)-szulfát-víz (1/7) és 7,5 g ammónium-szulfát 500 ml vízzel készített oldatát előbb 6,5 pH-értékre beállítjuk, majd sterilizáljuk. e) 50 literes fermentorba beadagolunk 30 liter steril tápközeget, melynek összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,3 % protein-hidrolizátum, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. Ezt beoltjuk 3 liter Arthrobacter simplex előtenyészettel /b) pont/, majd levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 9 órán keresztül 30 *C hőmérsékleten inkubáljuk. Ekkor hozzáadjuk a tenyészethez a jelen példa c) pontja szerint előállított steril llß,21-dihidroxi-17a-izopropoxi-metoxi-4-pregnen-3,20-dion-oldatot és a jelen példa d) pontja szerint készített oldatot, amely az adalékanyagokat tartalmazza. Ezután a fermentációt még 12 órán keresztül folytatjuk. A fermentáció befejezése után a kapott fermentátumot 5 liter etilén-dikloriddal stabilizáljuk, majd három ízben, alkalmanként 20-20 liter etilén-dikloriddal extraháljuk. Az etilén-dikloridos kivonatokat forgó bepárlókészülékben legfeljebb 50 *C hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. Az anyagot ezután tisztítás céljából alumínium-oxidon kromatografáljuk. Ily módon 4,2 g llß,21-dihidroxi-17a-izopropoxi-metoxi-1,4-pregnadien-3,20-diont kapunk, melynek olvadáspontja 58/63-65 °C. 10 * 10. Példa a) Arthrobacter simplex ATCC 6946 törzs száraz kultúráját leöblítjük és ezzel beoltunk egy kétliteres Erlenmayer-lombikban levő 1 liter steril tápközeget, melynek összetétele az alábbi: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, pH = 7 értékre beállítva. A beoltott tápközeget 30 *C hőmérsékleten 72 órán át 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. b) 50 literes fermentorban 30 liter steril tápközeget beoltunk 1 liter fenti Arthrobacter simplex tenyészettel, majd ezt az előtenyészetet 30 *C hőmérsékleten levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 24 órán át inkubáljuk. A tápközeg összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. c) 9 g llß,21-dihidroxi-17a-metoxi-metoxi-4- pregnen-3,20-diont feloldunk 300 ml dimetilformamidban és ezt követően az oldatot sterilre szüljük. d) 7,5 g kobalt(II)-szulfát-víz (1/7) és 7,5 g ammónium-szulfát 500 ml vízzel készített oldatát előbb 6,5 pH-értékre beállítjuk, majd sterilizáljuk. e) 50 literes fermentorba beadagolunk 30 liter steril tápközeget, melynek összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,3 % protein-hidrolizátum, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. Ezt beoltjuk 3 liter Arthrobacter simplex előtenyészettel /b) pont/, majd levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 9 órán keresztül 30 'C hőmérsékleten inkubáljuk. Ekkor hozzáadjuk a tenyészethez a jelen példa c) pontja szerint előállított steril 1 lß,21-dihidroxi-17a-metoxi-metoxi-4-pregnen-3,2Ö-dion-oldatot és a jelen példa d) pontja szerint készített oldatot, amely az adalékanyagokat tartalmazza. Ezután a fermentációt még 6 órán át folytatjuk. A fermentáció befejezése után a kapott fermentátumot 5 liter etilén-dikloriddal stabilizáljuk, majd három Ízben, alkalmanként 20-20 liter etilén-dikloriddal extraháljuk. Az etilén-dikloridos kivonatokat forgó bepárlókészülékben legfeljebb 50 ’C hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. Az anyagot ezután tisztítás céljából alumínium-oxidon kromatografáljuk. Ily módon 5,4 g llß,21-dihidroxi-17a-metoximetoxi-l,4-pregnadien-3,20-diont kapunk, melynek olvadáspontja 229/230-231 “C. 11. Példa a) Arthrobacter simplex ATCC 6946 törzs száraz kultúráját leöblítjük és ezzel beoltunk egy kétliteres Erlenmayer-lombikban levő 1 liter steril tápközeget, melynek összetétele az alábbi: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, pH = 7 értékre beállítva. A beoltott tápközeget 30 *C hőmérsékleten 72 órán át 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. b) 50 literes fermentorban 30 liter steril tápközeget beoltunk 1 liter fenti Arthrobacter simplex tenyészettel, majd ezt aza előtenyészetet 30 *C hőmérsékleten levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 24 órán át inkubáljuk. A tápközeg összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, ■ 7 i 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
