187390. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-oxo-delta1,4-szteroid-származékok előállítására
1 187 390 2 0,1 % élesztőkivonat, pH = 7 értékre beállítva. A beoltott tápközeget 30 *C hőmérsékleten 72 órán át 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. b) 50 literes fermentorban 30 liter steril tápköze- 5 get beoltunk 1 liter Arthrobacter simplex tenyészettel, majd ezt az előtenyészetet 30 'C hőmérsékleten levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/ perc) közben 24 órán át inkubáljuk. A tápközeg összetétele: 8 * 10 * * * * 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, 15 * * * * pH = 7 értékre beállítva. c) 21 g llß,17a,21-trihidroxi-6a-metil-4-pregnen-3,20-diont feloldunk 300 ml etilénglikol-monometil-éterben, majd az oldatot sterilre szüljük. d) 12 g kobalt(II)-szulfát-víz (1/7) és 12 g ammó- 20 nium-szulfát 500 ml vízzel készített oldatát előbb pH = 6,5 értékre beállítjuk, majd sterilizáljuk. e) 50 literes fermentorba beadagolunk 30 liter steril táptalajt, melynek összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 25 0,05% glükóz-monohidrát, 0,3 % protein-hidrolizátum, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. 30 Ezt beoltjuk 3 liter Arthfobacter simplex előtenyészettel /b) pont/, majd levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 9 órán keresztül 30 *C hőmérsékleten inkubáljuk. Ekkor hozzáadjuk a tenyészethez a jelen példa c) pontja 35 szerint előállított steril llß,17a,21-trihidroxi-6ametil-4-pregnen-3,20-dion-oldatot és a jelen példa d) pontja szerint készített oldatot, amely az adalékanyagokat tartalmazza. Ezután a fermentációt még 7 órán át folytatjuk. 40 A fermentáció befejezése után a kapott fermentátumot 5 liter etilén-dikloriddal stabilizáljuk, majd három ízben, alkalmanként 20-20 liter etilén-dikloriddal extraháljuk. Az etilén-dikloridos kivonatokat forgó bepárlókészülékben legfeljebb 50 *C hő- 45 mérsékleten vákuumban bepároljuk. Az anyagot ezután tisztítás céljából alumínium-oxidon kromatografáljuk. Ily módon 19,1 g Uß,17a,21-trihidroxi-6a-metil-l,4-pregnadien-3,20-diont kapunk, melynek olva- 50 dáspontja 235/236-238 *C. 8. Példa a) Arthrobacter simplex ÄTCC. 6946 törzs szá- 55 ráz kultúráját leöblítjük és ezzel beoltunk egy kétliteres Erienmayer-lombikban levő 1 liter steril tápközeget, melynek összetétele az alábbi: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 60 0,1 % élesztőkivonat, pH = 7 értékre beállítva. A beoltott tápközeget 30 *C hőmérsékleten 72 órán át 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk. 65 b) 50 literes fermentorban 30 liter steril tápközeget beoltunk 1 liter fenti Arthrobacter simplex tenyészettel, majd ezt az előtenyészetet 30 *C hőmérsékleten levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 24 órán át inkubáljuk. A tápközeg összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. c) 3 g llß,21-dihidroxi-17a-propoxi-metoxi-4- pregnen-3,20-díont feloldunk 200 ml etilénglíkolmonometil-éterben, majd az oldatot sterilre szűrjük. d) 7,5 g kobalt(II)-szulfát-víz (1/7) és 7,5 g ammónium-szulfát 500 ml vízzel készített oldatát előbb 6,5 pH-értékre beállítjuk, majd sterilizáljuk. e) 50 literes fermentorba beadagolunk 30 liter steril tápközeget, melynek összetétele: 0,5 % kukoricalekvár, 0.05% glükóz-monohidrát, 0,3 % protein-hidrolizátum, 4 ml Silikon SH, 4 ml Pluronic, pH = 7 értékre beállítva. Ezt beoltjuk 3 liter Arthrobacter simplex előtenyészettel /b) pont/, majd levegőztetés (2 m3/óra) és keverés (220 fordulat/perc) közben 9 órán keresztül 30 *C hőmérsékleten inkubáljuk. Ekkor hozzáadjuk a tenyészethez a jelen példa c) pontja szerint előállított steril llß,21-dihidroxi-17apropoxi-metoxi-4-pregnen-3,20-dion-oldatot és a jelen példa d) pontja szerint készített oldatot, amely az adalékanyagokat tartalmazza. Ezután a fermentációt még 6 órán át folytatjuk. A fermentáció befejezése után a kapott fermentátumot 5 liter etilén-dikloriddal stabilizáljuk, majd három ízben, alkalmanként 20-20 liter etilén-dikloriddal extraháljuk. Az etilén-dikloridos kivonatokat forgó bepárlókészülékben legfeljebb 50 *C hőmérsékleten vákuumban bepároljuk. Az anyagot ezután tisztítás céljából alumínium-oxidon kromatografáljuk. Ily módon 2,4 g llß,21-dihidroxi-17a-propoximetoxi-l,4-pregnadien-3,20-diont kapunk, melynek olvadáspontja 121/125-127 *C. 9. Példa a) Arthrobacter simplex ATCC 6946 törzs száraz kultúráját leöblítjük és ezzel beoltunk egy kétliteres Erienmayer-lombikban levő 1 liter steril tápközeget, melynek összetétele az alábbi: 0,5 % kukoricalekvár, 0,05% glükóz-monohidrát, 0,1 % élesztőkivonat, pH = 7 értékre beállítva. A beoltott tápközeget 30 *C hőmérsékleten 72 órán át 180 fordulat/perc sebességgel rázatjuk^ b) 50 literes fermentorban 30 liter steril tápközeget beoltunk 1 liter fenti Arthrobacter simplex tenyészettel, majd ezt az előtenyészetet 30 *C hőmér-6
