187372. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a C-15003 P-O antibiotikum előállítására
1 187 3^2 2 5. táblázat Antimikrobiális spektrum Vizsgált mikroorganizmus IFO szám Táptalaj Óra Gátló átmérő Alternaria kikuchiana 7515 PSA* 48 38 Fusicladium levieri 6477 PSA* 90 68 Helminthosporium sigmoideum var. szabálytalan 5273 PSA* 48 55 Pyricularia cryzae-PSA* 48 53 Elsinoe fawcetti 8417 PSA* 90 55 Fusarium oxysporum f. cucumerinum _ PSA* 48 20 ' Guignardia laricina 7888 PSA* 48 12 Cochlioborus miyabeanus 5277 PSA* 48 60 Diaporthe citri 9170 PSA* 48 55 Gibberella zeae 8850 PSA* 48 37 Sclerotinia sclerotiorum 9395 PSA* 90 65 Venturia pirina 6189 PSA* 48 50 Pellicularia sasakii 9253 PSA* 48 50 Pythium aphanidermatum 7030 PSA* 48 58 Botrytis cinerea-PSA* 48 48 Aspergillus niger 4066 PSA* 48 0 Pénicillium chrysogenum 4626 PSA* 48 35 Rhizopus nigricans 6188 PSA* 48 25 Saccharomyces cerevisiae 0209 PSA* 48 0 Rhodotorula rubra 0907 PSA* 48 28 Trichophyton rubrum 5467 GB** 48 38 Trichophyton mantagrophytes 7522 GB** 48 38 Candida albicans 0583 GB** 48 0 Candida utilis 0619 GB** 48 0 Cryptococcus neoformans 0410 GB** 48 43 * PSA: Burgonyacukor agar táptalaj ** GB: Glükóz tápsó agar táptalaj B) Antitumor hatás A C-15003 P-3, P-3' és P-4 gyógyászati hatását (intraperitoneálisan, 9 egymást követő napon végzett adagolás alapján) az egerekben kiváltott leukémia (1 x 106 sejt/állat, egér, intraperitoneálisan transzplantált) ellen vizsgáltuk. Az eredmények azt mutatták, hogy az élettartam meghosszabbító hatásban kifejezve ezek a vegyületek 200% antitumor hatást mutattak 0,006 25 mg/kg/nap dózis esetén. C) Toxicitás Akut toxicitási vizsgálatban, amelyet vizsgálati állatokként egereket használva, a C-15003 P-3, P-3' és P-4 vegyületeket intraperitoneálisan adagolva végeztünk, valamennyi antibiotikum LD50- értéke 0,313 mg/kg felett volt. Mint már említettük, a C-15003 antibiotikum erős gátló hatást mutat gombák és protozoonok ellen, ezért gombaeilenes és protozoon ellenes szerként fejt ki értékes tevékenységet. Továbbá, miután a C-15003 antibiotikum tumorban megbetegedett emlős állatokban (például egerekben) élettartam meghosszabbító hatást fejt ki, az is várható, hogy a vegyület tumor-ellenes gyógyszerként is felhasználható. A C-15003 antibiotikum, mint gombaellenes és protozoon ellenes szer, előnyösen használható a bakteriális ökológia céljára, a talajban, aktív iszapban, állati testnedvekben vagy más hasonló közegekben. így, ha értékes baktériumokat kívánunk izolálni talajmintákból vagy ha a baktériumok működését kívánjuk megvizsgálni a gombák és protozoonok működésétől függetlenül, a hulladékok kezelésében használt aktív iszap-rendszer feldolgozásával és analízisével kapcsolatban, a találmány szerint előállított antibiotikum felhasználható arra, hogy a baktériumflóra szelektív növekedését váltsuk ki az ugyancsak jelen levő gombák és protozoonok növekedésének egyidejű megállítása mellett. Egy tipikus esetben a mintát egy folyékony vagy szilárd táptalajhoz adjuk, és a táptalaj 1 ml-ére számítva 0,1 ml 10-100 /tg/ml-es antibiotikum oldatot adagolunk, oldószerként 1%-os metanol-víz elegy et használva. Ezután inkubálást végzünk. A találmány szerint előállított C-15003 antibiotikum antimikrobiális szerként is felhasználható növényi betegségek kezelésére, amelyeket különböző, az 5. táblázatban felsorolt mikroorganizmusok váltottak ki. Egy jellegzetes felhasználás során a C-15003 antibiotikumot 1%-os metanolos vizes oldat formájában használjuk fel, amely 0,5-5 /rg/ml antibiotikumot tartalmaz. A C-15003 antibiotikum például felhasználható a vörösesbarna hüvelyrothadás, az elfonnyadás, a Helminthosporium levélbetegség és a rizsnövények üszög megbetegedésének gyógyítására. így tehát nyilvánvaló, hogy a C-15003 P-3, P-3' és P-4 antibiotikumok valamennyien új vegyületek, és ugyanazzal a vázrendszerrel rendelkeznek, valamint hogy intermedierekként használhatók más gyógyászatilag hasznos vegyületek előállításában, így, egy deacilezési reakcióval, C-15003 P-0 (maytansinol) állítható elő a találmány szerinti antibiotikumból, amely a 3-helyzetben egy hidroxilcsoportot tartalmaz. Ebből a szempontból, miután az acilcsoport //-helyzetben van a karbonilcsoporthoz viszonyítva, a szokásos reduktív hidrolízises eljárások sikerrel alkalmazhatók. így egy komplex fémhidrid (például lítium-alumínium-hidrid) segítségével, alacsony hőmérsékleten (például -20-0 °C) a 3-helyzetű O-észterkötés hidrolitikusan lehasítható, anélkül hogy egyéb funkcionális csoportokat, így karbonil-, epoxicsoportokat, szén-szén kettős kötéseket befolyásolnánk. így tehát maytansinolt tudunk előállítani. Az így kapott maytansinol minta fizikai és kémiai jellemzői jó egyezésben vannak a Kupchan és mtsai által a következő folyóiratban megadott adatokkal: The Journal of American Chemical Society 97, 5294-5295 (1975). Találmányunk további részleteit a következő példákkal illusztráljuk a korlátozás szándéka nélkül. A példákban % alatt vegyes %-ot értünk. A C-15003 antibiotikum előállítását ismertető példák: 1. példa Egy élesztőextraktum - maláta extraktum táptalajon növesztett C-15003 számú Nocardla mikroorganizmust (IFO 13 726, FERM 3992, ATCC 31 281) egy 40 térfogatrész beoltó táptalajt tartalmazó 200 térfogatrész méretű fermentor beoltására használunk fel. A beoltó táptalaj összetétele: 2% glükóz, 3% oldható keményítő, 1% nyers szójabab liszt, 1% kukoricacsávázó folyadék, 0,5% polipepton, 0,3% NaCl, 0,5% CaC03, pH 7,0. A beoltott táptalajt 28 °C-on inkubáljuk 48 órán át inokulum 5 19 15 20 25 3C 36 40 45 50 55 60 65 8
