187372. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a C-15003 P-O antibiotikum előállítására
1 187 372 2 4. táblázat folytatása C-15003 antibiotikum P-3 P-3' P-4 C32H43CIN2O9 — C32H43C1N209 = C33H45C1N209 = = 635 169 = 635 169 = 649 196 oldódik kloroformban, oldódik kloroformban, oldódik kloroformban, etilacetátban, aceton- etihcetátban, aceton- etilacetátban, acetonban, etanolban, méta- ban, etanolban, méta- ban, etanolban, metanolban, piridinben, tét- nolban, piridinben, tét- nolban, piridinben, tetrajiidrofuránban és di- rahidrofuránban és di- rahidrofuránban és dimetilszulfoxidban metilszulfoxidban metilszulfoxidban Színreakciók Dragendorff: pozitív Beilstein: pozitív Dragendorff: pozitív Beilstein: pozitív Dragendorff: pozitív Beilstein: pozitív A fenti molekuláris szerkezetet és a következők- 20 ben megadott antimikrobiális és antitumorhatást alapul véve a találmány szerinti eljárással előállított antibiotikumot összehasonlítottuk az antibiotikumok ismert csoportjaival. Az irodalomkutatás során nem találtunk a C-15003-hoz hasonló antibio- 25 tikumot. Egy olyan kutatás azonban, melynek az volt a célja, hogy találjunk olyan anyagokat, amelyek a jelen antibiotikumhoz hasonló ultraibolya abszorpciót mutatnak, a növényekben előforduló és egyéb természetes előfordulás szerves vegyületek 30 között a maytanacin csoportokhoz vezetett bennünket, és, főként a molekuláris szerkezetet alapul véve, arra a feltételezésre juttatott, hogy az új antibiotikum a két nitrogénatomot tartalmazó vegyüle- , tek maytanacin csoportjához tartozik. A maytana- 35 cin-t növényekből nyerték ki, és először az American Chemical Society 97, 5294 (1975) folyóiratban publikálták. A maytanacin tömegspektruma a következő: M +-(a) M+-(a + b) 485-CH-, 485-C1 40 545 485 470 450 (a) = H20 + HNCO 0 1 (b) = R—C—OH 45 A C-15003 P-3, P-3' és P-4 vegyületekre kapott 485, 470 és 450 m/e értékek azonnal meggyőztek bennünket, hogy ezek a vegyületek a maytanacinnal azonos vázrendszerrel rendelkeznek, attól a 3-helyzetű acilcsoport minőségében különbözve. 50 így világos, hogy a C-15003 új vegyület. Ha C-15003 P-3, P-3' és P-4 vegyületeket lúgos lebontásnak vetjük alá, és gázkromatográfiásán analizáljuk a felszabadított karboxilcsoportok meghatározása céljából, azt találjuk, hogy a C-15003 P-3, 55 P-3' és P-4 vegyületekből ebben a sorrendben izovajsav vajsav és izovaleriánsav szabadul fel. Az 1. ábra a fenti adatokon alapuló szerkezeteket mutatja a C-15003 P-3, P-3' és P-4 vegyületekre. Biológiai aktivitás ti táptalajként papírkorong eljárással meghatároztuk az alábbiakban megnevezett mikroorganizmusokkal szembeni gátló koncentrációkat. így 0,02 ml 300 //g/ml-es, C-15003 P-3, P-3' illetve P-4 oldattal impregnált szűrőpapír korongokat az alábbi mikroorganizmusokkal inokulált lapokra helyeztünk el a minimális gátló koncentráció meghatározása céljából. Az eredmények azt mutatták; hogy a következő mikroorganizmusokkal szemben az antibiotikumok nem mutattak hatást: Escherichia coli, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, Mycobacterium avium. Másrészt olyan agar lemezekkel, amelyek a vizsgálati táptalajt (3,5 dinátrium-hidrogénfoszfát, 0,5 g monokálium-dihidrogénfoszfát, 5 g élesztő extraktum [Difco], 10 g glükóz, 15 g agar, 1000 ml desztillált víz, pH 7) tartalmazták, a Talaromyces acellaneus növekedésének gátlása volt megfigyelhető. A kiértékelés szerint a minimális gátló koncentrációk a C-15003 P-3 és P-3' esetében 3 //g/ml, míg a C -15003 P-4 esetében 1,5 /rg/ml volt. Továbbá a Tetiahymena pyriformis W egy vad törzsét tenyésztettük egy olyan táptalajon, amely 20 g proteózpeptont (Difco), 1 g keményítő extraktumot, 2 g glükózt, 1000 ml desztillált vizet és 10 ml 1 mólos foszfát puffert (pH 7,0) tartalmazott, 28 °C-on, 44—18 órán át, és sorozat hígításos módszerrel meghatároztuk az antibiotikus hatású vegyületek növekedésgátló hatását ezzel a meghatározott mikroorganizmussal szemben. A minimális gátló koncentráció a C-15003 P-3 és P-3' esetében 1 //g/ml, míg a C-15003 P-4 esetében 0,5 //g/ml volt. . A gombaellenes hatást a következő 5. táblázatban adjuk meg. Mint az 5. táblázatból, látható, a C-15003 növekedésgátló hatást mutat a növényi betegségeket okozó mikroorganizmusokkal szemben 0,02 ml 1000 //g/ml koncentrációjú C-15003 oldattal impregnált szűrőpapír korongokat olyan lapokra helyeztünk, amelyeket a következő, 5. táblázatban megadott mikroorganizmusokkal inokuláltunk. A) antimikrobiális aktivitás Triptikáze-szója agart (BBL) használva vizsgála- 65 7
