187334. lajstromszámú szabadalom • Készítmény észteráz és/vagy proteáz enzimek kimutatására és eljárás megfelelő szubsztrátum előállítására
°C hőmérsékletű fürdőn bepároljuk. A maradékot 200 ml etil-acetáttal oldjuk, és egymásután 3 x 100 ml 5%-os citromsavoldattal és utána 3 x 100 ml 5%-os nátrium-hidrogén-karbonát oldattal mossuk. A szerves fázist nátrium-szulfáttal való szárítás után vákuumban bepároljuk. Az olajos nyersterméket szilikagéllel töltött oszlopon toluol/etilacetát (4: 1) oldószereleggyel eluálva tisztítjuk. A megfelelő összegyűjtött frakciók bepárlása után a maradékot kevés diklór-metánban oldjuk, és dietil-éter hozzáadásával kicsapjuk. így 5,8 g (38%) 1 -(N-tozil-L-alaniloxi)-3,5-dimetoxi-benzolt kapunk színtelen kristályos anyagként, amelynek olvadáspontja 110 "C. [a]2D° = - 52,5“ (c = 1; aceton), Hasonló módon N-tozil-L-alanin és a megfelelően szubsztituált fenolok vagy naftolok reakciójával a következő anyagokat kapjuk: 6.1. (N-Tozil-L-alaniloxi)-benzol; színtelen kristályok, olvadáspont: 113 “C. [a]* = - 63,8“ (c = 1; aceton). 6.2. 1 -(N-T ozil-L-alaniloxi)-3-(dimetil-amino)benzol; színtelen, amorf por. Md = -36,6“ (c=l; metanol). Vékonyrétegkromatográfia: kész szilikagél lemezen, futtatószer: toluol/dioxán 2: 1 elegy; detektálás ultraibolya fényben;RF-érték: 0,68. 6.3. l-(N-Tozil-L-alaniloxi)-3-metoxi-benzol; színtelen kristályos anyag, olvadáspont: 60-61 “C. Md = “62,9° (c=l; metanol). 6.4. 1 -(N-Tozil- L-aianiloxi)-naftalin; színtelen viszkózus olaj. [u]TM= ~ 27,3“ (c = 1; metanol). Vékonyrétegkromatográfia: kész szilikagél lemezen; futtatószer: toluol/dioxán (4 : 1) elegy; detektálás: ultraibolya fényben; Ráérték: 0,53. 6.5. l-(N-ToziI-L-alaniloxi)-4-metoxi-naftalin: színtelen kristályok, olvadáspont: 136 °C. Md = -42,6° (c= 1; aceton). 6.6. l-(N-Tozil-L-alaniloxi)-4-izopropoxi-nafta- Iin: színtelen kristályok, olvadáspont: 93-96 “C. [u]“ = -38,0“ (c = 1; aceton). 6.7. l-(N-Tozil-L-alaniloxi)-4-pentiloxi-naftalin: színtelen kristályok, olvadáspont: 87 °C. Md = -36,9“ (c= I; aceton). 6.8. l-(N-Tozil-L-alaniloxi)-3-(dietil-amino)benzol. színtelen kristályok, olvadáspont: 83-84 “C. [a]u = —59,4° (c = 1; metanol). Vékonyrétegkromatográfia: kész szilikagél lemezen, futtatószer: xilol/2-butanon (1 : 1) elegy; R,,-érték: 0,68. 6.9. l-(N-Tozil-L-alaniloxi)-3-metil-5-metoxibenzol: színtelen kristályok, olvadáspont: 79-81 °C. [a]“ = 62,2° (c = 1; metanol). Vékonyrétegkromatográfia: kész szilikagél lemezen, futtatószer: kloroform/metanol (20 : 1) elegy; R,-érték: 0,79. 7. példa 2-(N-ToziI-L-alaniloxi)-4-metoxi-naftalin. 1. oldat: A sav-k lóridnak az egylépcsős módszer szerinti előállításához 19,44 g (0,08 mól) N-tozil-L-alanint oldunk 100 ml vízmentes dimetil-formamidban, és az oldatot —20 “C-ra hűtjük. Utána keverés és hűtés közben hozzápipettázunk 5,81 ml (0,08 mól) tionil-kloi időt, és a reakcióelegyet 30 percig a - 20 “C-os hűtőfürdőben hagyjuk. 2. oldat: , . 6,96 g (0,04 mól) 4-metoxi-2-naftol 50 ml vízmentes dimetil-formamiddal készült oldatához 11,0 ml(0,08 mól) trietil-amint adunk. Az elegyet - 20 “C-ra hűtjük. Reakció: Az 1. oldatot a 2. oldatba öntjük, és nedvesség kizárásával körülbelül 4 órát kevertetjük -20 °C- on, utána a reakcióelegyet éjszakán át jégszekrényben hagyjuk állni. Feldolgozáshoz a reakcióelégyet vákuumban legfeljebb 50 “C fürdőhőmérsékleten bepároljuk. A maradékot körülbelül 150 ml etil-acetáttal oldjuk, és egymásután 3 x 100 ml 5%-os citromsavoldattal és utána 3 x 100 ml 5%-os nátrium-hidrogénkarbonát oldattal mossuk. Nátrium-szulfáton való szárítás titán a szerves fázist vákuumban bepároljuk. A nyersterméket szilikagéllel töltött oszlopon toluol/etil-acetát (4: 1) eleggyel eluálva tisztítjuk. A megfelelő összegyűjtött frakciók vákuumban való bepárlása után a maradékot kevés diklór-metánban oldjuk, és utána dietil-éter/petroléter (1:2) eleggyel kicsapjuk. így 2,8 g (18%) 2-(N-tozil-L- alaniloxi;-4-metoxí-naftalint kapunk színtelen kristályos anyagként, ámelynek olvadáspontja: 119 “C. Md = -57,9° (c=l; aceton). 8. példa. 2-Meto\i-4-morfolino~benzol-diazónium-tetraklór-cinkát. 5-Klór-2-nitro-anizolt 1,5-szeres moláris feleslegű morfolinnal toluolban több órán (10-14 óra) át visszafolyó hűtő alatt forralva reagáltatunk. A reakció célszerűen oldószerként morfolinban is végrehajtható. Ekkor az 5-klór-2-nitro-anizolt 5-10- szeres térfogatú morfolinnal elegyítjük. Az esetleg demetilezett terméket nátrium-hidroxid oldattal extrahálva eltávolítjuk, vagy diazometánnal reagáltatva utánmetilezzük. A kapott nitrovegyületet szokásos módon palládiumosszénnel metanolban vagy ón< II)-kloriddal sósavban amiddá redukáljuk, és ezt diazotáljuk. A diazónium-vegyületet ismert módon sósavas oldatban tömény cink(II)-klorid oldat hozzáadásával a tetraklór-cinkáttá vagy tetrafluoro-bórsav hozzáadásával a tetrafluoro-boráttá alakítjuk, és így különítjük el. Olvadáspont: 170-172 “C (tetraklór-cinkát), 166-168 °C (tetrafluoro-borát). ! 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65
