187296. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új 2-(8-aciloxi-2,6-dimetil-polihidroxi-naftil-1)-etán-származékok előállítására
1 187.296 2 130 fordulat/perc mellett 84 óráig inkubáltuk 28 *C-on, miközben az első 12 óra alatt kb. 141 liter/perc, míg a második 84 órában kb. 282 liter/ perc levegőáramot tartottunk fenn. B) Elkülönítés 1. Extrakció A teljes táptalaj egyenként 100 gallonos (kb. 454 liter) két adagját egyesítettük, keverés közben 800 ml tömény sósav hozzáadásával 4,1-es pH-ra savanyítottuk, 75 gallon (kb. 340 liter) etil-acetát hozzáadásával extraháltuk, majd további 2 órán át kevertük. Ezután hozzáadtunk körülbelül 25 font (kb. 11,2 kg) szilíkát-tartalmú szűrési segédanyagot, majd a szuszpenzió teljes egészét átnyomtuk egy 24 inches (kb. 61 cm-es) szűrőprésen. A nuccs mosásához további 75 gallon (kb. 340 liter) etil-acetátot használtunk, majd a présen az áramoltatás irányának négyszeri megváltoztatásával továbbfolytattuk az extrakciót. Ezután az összes mosáshoz használt oldószert eltávolítottuk a présből, majd egyesítettük az első szűrlettel. Hagytuk a kétfázisú szűrletet leülepedni, majd a vizes réteget eltávolítottuk. Az etil-acetátos fázist 10 gallon (kb. 45,4 liter) ionmentesitett vízzel mostuk, hagytuk a fázisokat szétválni, majd az etil-acetátos extraktumokat csökkentett nyomáson betöményítettük, így körülbelül 10 gallon (kb. 45,4 liter) maradékot kaptunk. 2. Laktonizálás Egy másik 300 gallonos (kb. 1360 literes) táptalajból származó etil-acetátos extraktumot hozzáadtunk a fenti extraktumhoz, és az extraktumok térfogatát vákuumdesztillációval mintegy egyharmadára csökkentettük. Hozzáadtunk körülbelül 50 gallon (kb. 227 liter) toluolt, majd csökkentett nyomáson betöményítettük mintegy 32 gallonra (kb. 145 literrel); ezt a lépést megismételtük; majd hozzáadtunk annyi toluolt, hogy az elegy térfogata 75 gallon (kb. 340 liter) legyen. Az elegyet nyomáscsökkentés nélkül 2 órán át refluxáltattuk, miközben a hőmérséklete 106 °C felett volt. Ezt követően az oldatot csökkentett nyomáson kis térfogatra betöményítettük, majd további bepárlással - amelyet egy forgó bepárlóban és vákuum alatt hajtottunk végre - olajos maradékot kaptunk. 3. Kromatografálás szilikagélen A fent kapott extraktumot megszabadítottuk az összes oldószertől oly módon, hogy 2 gallon (kb. 9,1 liter) metilén-kloriddal átmostuk, majd bepárlással ismét olajos terméket állítottunk elő. Az olajos maradékot körülbelül 5 gallon (kb. 22,7 liter) etil-acetát/metilén-klorid elegyben (30/70 térfogatarányú) feloldottuk, majd 2,8 kg szilikagél hozzáadásával szuszpenziót állítottunk elő. A szuszpenziót rávittük ugyanazzal az oldószereleggyel töltött, 12x15 inch (kb. 30,5 x 38 cm) méretű szilikagél oszlopra. Az eluálást etil-acetát/metilén-klorid eleggyel (40/60 térfogatarányú) végeztük 800 ml/perc sebességgel. Egy 10 gallonos (kb. 45,4 literes) előfrakció után 4 gallonos (kb. 18,1 literes) frakciókat vettünk. A 6-10. frakciókat egyesítve csökkentett nyomáson bepároltuk, majd a kapott olajos maradékot feloldottuk forró etil-acetátban, aktívszénnel derítettük, forrón szűrtük, majd lehűtöttük. A (IIIm) képletü vegyület (Q = (15) képletű csoport) kristályait leszűrtük és az anyalúgokat további kromatografálásra olajjá töményítettük. A tiszta (IIIJ képletü termék olvadáspontja: 170-171 °C. 4. Ismételt kromatografálás szilikagélen A fenti anyalúgmaradékot metilén-kloridos oldatban egyesítettük további anyalúgmaradékokkal., melyeket egy 600 gallonos (kb. 2725 literes) másik fermentáció termékeinek hasonló módon történő feldolgozásából kaptunk. Az oldat felét szilikagélen továbbkromatografáltuk. A szilárdanyagtartalmat egy kis alikvot részben 325 g-nak találtuk. Az oldatot 40 g aktívszénnel derítettük, szűrtük, majd a nuccsmaradékot metilén-kloriddal mostuk. Az egyesített mosófolyadékot és szűrletet csökkentett nyomásön bepárolva olajos maradékot kaptunk. A maradékot feloldottuk 800 ml etilacetát/metilén-klorid elegyben (30/70 térfogatarányú), és 225 g szilikagéllel szuszpendáltuk. A szuszpenziót felvittük ugyanazzal az oldószereleggyel töltött, 14 x 36 cm-es méretű szilikagél oszlopra. Az eluálást etil-acetát/metilén-klorid eleggyel (40/60 térfogatarányú) végeztük. Egy 3 literes előfrakciót félretettünk, majd 800 ml-es frakciókat fogtunk fel. 5 Kromatografálás ellentétes fázisú tölteten Az iménti kromatografálás 12. frakciójának 40 ml-ét betöményítettük 500 mg olajjá, és az olajat ismét feloldottuk 5 ml acetonitrilben. Az acetonitriles oldatot felvittük 5/8 inch (kb. 1,6 cm) átmérőjű, 6 láb (kb. 1,83 cm) hosszú, rozsdamentes acélból készült kromatografáló oszlopra, amely „Bondapak C18/Porasil B” nevű, preparatív ellentétes fázisú folyadékkromatográfiás oszlop töltőanyagot tartalmazott (gyártója: Waters Associates, Inc., Milford, Mass. 01757). Az oszlopot 55 tf% acetonitrilt és 45 tf% 0,05 m ammónium-foszfát-oldatot (pH = 3) tartalmazó eleggyel eluáltuk. Azeluátum térfogatának 1360 és 1700 ml közé eső részét a refrakciós index detektálása alapján egyesítettük. A szerves oldószert csökkentett nyomáson lehajtottuk, majd a visszamaradó vizes oldatot etil-acetáttal extraháltuk. Az etil-acetátot vákuumban lehajtottuk, és a maradék 120 mg terméket tömény acetonitriles oldatából átkristályositottuk. Ily módon (III^) képletnek megfelelő terméket (Q = (15) képletű csoport) kaptunk, melynek olvadáspontja 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
