187167. lajstromszámú szabadalom • Eljárás gyógyászati célú, új típusú polinukleáris vas(III)-vegyeskomplex hatóanyagú oldat előállítására
1 . 187 167 2 san semleges (nem ionos) polinukleáris nagy spinszámú vas(III) vegyeskomplex, melynek vas központi atomja laktobionát, acetát és hidroxidligandumokat tart megkötve. Az injekciós oldat hatóanyagát képező vaskomplex egységes volta a vas oxidációs állapota és spinszáma az oldat gyorsfagyasztása útján előállított jég Mössbauer (visszalökődésmentes y-sugár rezonancia abszorpció) színképével igazolható. A Mössbauer spektrum (3. ábra) kimutatja, hogy az előállítás során a vas(III) kis része redukálódik. Az a)-val jelzett spektrum vas(II)-mentes oldatban történt felvételt, míg a ó)-vel jelzett 4,7% vas(II)tartalmú oldatban történt felvételt mutat be. Mivel a keletkező vas(II)tartalom is a vegyeskomplex alakjában van jelen, az 5-6%-nál nem nagyobb mérvű redukció a biológiai hatást nem befolyásolja A Mössbauer paraméterek (vas/III): izomer eltolódás: 0,45 mm/s fémvasra vonatkoztatva, kvadrupolus felhasadás 0,83 (mm/s) egyértelműen mutatja az oxigén donoratomokhoz kapcsolódó nagy spinszámú vas(III) központi atomot. A tapasztalt vonalszélesség (0,57 mm/s) a polinukleáris komplex vasatomjai közel egyenértékű voltára utal. A vas(III) és vas(II) atomokhoz rendelhető spektrumrészletek intenzitása a vas(III): vas(II) arányt adja meg. A vas(II) vonalak paraméterei (izomer eltolódás: 1,18 mm/s, kvadrupólus felhasadás 3,20 mm/s) a komplexben kötött nagy spinszámú vas(II)-re jellemzőek. A találmány szerinti eljárással előállított oldatok vas(II) tartalma nem haladta meg az összvastartalom 5,0%-át. A találmány szerinti eljárással készült injekciós oldat hatóanyagát képező komplexmolekula vastartalma (az egy molekulában elhelyezkedő vas központi atomok száma) az oldat összvastartalmának ismeretében (mely komplexometriásan mérhető) az ozmózis nyomás értékéből számítható ki. A vastartalom oldatban tartásához minimálisan szükséges ligandumkoncentrációt tartalmazó (1,84 mol/dm3 vas, 0,46 mol/dm3 laktobionsav és utóbbival ekvivalens glukopiranóz dextrán-egység) injekciós oldat ozmózis nyomása 0,23 mol/dm3 komplexkoncentrációt mutat. A találmány szerinti eljárással előállított egy komplexmolekula tehát 8 vasatomot tartalmaz. Ez az oldat fiziológiai szempontból hipotoniás. Ezért célszerű az injekció előállításánál a szerves ligandumot kis feleslegben (0,25-0,25 vasegység helyett 0,33-0,33 vas egységnyit) alkalmazni. így közel izotoniás, 400 mOsm-nál nem nagyobb ozmózis nyomású oldat nyerhető. A fenti vizsgálatok alapján megállapítható, hogy a találmány szerint előállított injekciós oldat hatóanyagát képező polinukleáris vas(III) vegyeskomplex összetétele: Fe8L2D2Ac(OH)2, ahol L a laktobionát (vagy más cukorsav) ligandum, D a dextrán egy glukopiranóz egysége, Ac az acetátion. A komplex molekulatömege a fenti összetételnek megfelelően 2226, vastartalma 20,13%. Analóg vizsgálatok alapján a találmány szerint előállított dextránmentes vasinjekció hatóanyagának összetétele : Fe2LAc(0H)4 A fenti képletnek megfelelő molekula tömege 597,0, vastartalma 18,76%. A találmány szerinti eljárásban a kiindulási anyag vas(III)-acetát. A szilárd állapotban előállított és tárolt vas(ÍII)-acetát azonban vízoldékonyiágát (sőt ecetsavban való oldékonyságát) is elveszíti. Ezért frissen lecsapott és anionmentesre mosott vas(III)-hidroxid-csapadék ecetsavban történő azonnali oldása útján előállított ecetsavas vas(lll)acetát törzsoldatot használunk kiinduló anyagként. Ebben oldjuk a vassal ekvivalens számított mennyiségű szerves ligandumokat. Az így nyert oldatból vízgőz-desztillációval távolítjuk el a kiindulási törzsoldattal bevitt ecetsavfelesleget és ezzel együtt a komplexképződés során szabaddá váló protonok és a vas-acetát anionja közötti reakcióban keletkező ecetsavat. A vízgőz-desztillációt a megfelelő kémhatás beállásáig (pH = 4,5-5,0) kívánatos folytatni. Ezután vákuum-desztillációval az oldat a kívánt vastartalomnak (100 mg Fe/cm3) megfelelő térfogatra betöményítendő. A találmány szerinti eljárással kapott oldat megfelelő sterilizálás után használható. A kész oldatban szükség esetén adjuváns hatású vízoldható adalékanyagok (pl. BI2 vitamin) oldhatók. Az oldatok 0,1-0,2%-nyi tartósítószereket (például fenolt, benzilalkoholt, stb.) továbbá izotonizáló szereket (például nátriumklorid, szorbitol, stb.) tartalmaznak. A találmány szerint előállított oldat kémiai jellemzése a komplexometriás titrálással meghatározott vastartalom, a potenciometriásan meghatározott kémhatás (pH), a molaritást tükröző ozmózis nyomás, a vas központi atom oxidációs és spinállapotát tükröző Mössbauer színkép, a vízgőz-desztíllációt követő potenciometriás titrálással meghatározott acetáttartalom és gravimetriásán mérendő szárazanyag-tartalom alapján történik. A találmány szerinti eljárással előállitott 30 percig 100 °C-on sterilizált injekciós oldat 100, 200 mg Fe/testsúly kg adagjait kétnapos szopósmalacok combizomzatába fecskendezve helyi reakció vagy mérgező hatás nem mutatható ki. A részletes kísérletet az alábbiakban ismertetjük : 1. Kísérleti elrendezés A vizsgálatokat nagyüzemi körülmények között tartott 7-8 hetes Tetra-S hibrid süldőkön végeztük. Egy preparátum tesztelésére mindig 12 állatot használtunk. Közülük az eredmények értékelésénél azonban a két legszélső variációt mutató egyedet mindig kihagytuk. A kísérlet előtti napon délután 4 órakor (amikor a kísérleti csoportok kialakítása megtörtént) megvontuk az állatoktól a takarmányt, az ivóvíz fogyasztás lehetőségét azonban meghagytuk. így a reggel 8 órakor kezdődő kísérletet 16 órás koplalás i 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 3
